1、目的：
　　 1．探討骨髓間充質干細胞(BMSCs)對HT-29細胞和HCT-8細胞所形成腫瘤生長和分化的影響。
　　 2．研究BMSCs微環(huán)境對于HT-29細胞發(fā)生EMT及其相關pre-mRNA選擇性剪接的影響，分析相關剪接因子在其中表達水平的改變。
　　 3．探索PTB基因對于HT-29細胞生物學行為的調控。
　　 方法：
　　 1．體內實驗：將裸鼠分為BMSCs組、HT-29組、BMSCs+

2、HT-29組、HCT-8組和HCT-8+BMSCs組。分別將相應細胞懸液注射到裸鼠皮下，測量形成腫瘤體積，7周后取材、稱重并進行HE染色；Realtime RT-PCR和免疫組織化學染色檢測上皮標志基因E-CADHERIN表達水平。
　　 2．體外隔離共培養(yǎng)實驗：采用Transwell隔離共培養(yǎng)小室將HT-29細胞與BMSCs進行隔離共培養(yǎng)，觀察HT-29細胞形態(tài)改變，RT-PCR檢測EMT相關基因表達以及FGFR2、CD44和

3、ENAH的選擇性剪接方式，同時檢測FGFR2剪接調控因子的表達水平。
　　 3．PTB基因敲減實驗：HT-29細胞中將PTB基因敲減后檢測EMT相關基因的表達以及FGFR2、CD44和ENAH的選擇性剪接方式。
　　 結果：
　　 1.體內實驗中，BMSCs組未見腫瘤形成，HT-29+BMSCs組形成腫瘤質量和體積與HT-29組無明顯差異，但腫瘤分化水平更低，且E-CADHERIN表達水平更低。HCT-8+BMS

4、Cs組形成腫塊質量和體積與HCT-8組亦無明顯差異，且腫瘤分化程度亦差異不明顯，但均明顯低于HT-29組和HT-29+BMSCs組。
　　 2．與BMSCs體外隔離共培養(yǎng)后HT-29細胞形態(tài)發(fā)生EMT樣改變，EMT相關基因表達水平亦發(fā)生相應改變，同時FGFR2、CD44和ENAH由上皮特異性剪接方式轉變?yōu)殚g充質特異性剪接方式。參與FGFR2pre-mRNA選擇性剪接的基因TIA1、TIAL1、ESRP1、ESRP2、hnRNPM

5、、hnRNPH、hnRNPF、ASF/SF2、RBM38、PTB和C-MYC表達下調，而FOX2、MRG15和hnRNPA1表達水平無明顯改變。
　　 3．HT-29細胞在敲減PTB基因后，形態(tài)上可見其失去部分上皮細胞特征，F(xiàn)GFR2、CD44和ENAH剪接方式發(fā)生相應改變，同時上皮標志基因E-CADHERIN表達下調，ESRP1和ESRP2表達水平明顯下調，但間充質細胞特異基因VIMENTIN表達未發(fā)生明顯上調，三個重要的EM

6、T的調控因子SNAIL、SLUG和TWLST表達水平無明顯增加，MRG15表達水平亦無明顯改變。
　　 結論：
　　 1．三倍數(shù)目的BMSCs沒有明顯改變HT-29細胞和HCT-8細胞所形成腫瘤的體積和質量，但BMSCs的存在使HT-29細胞形成腫瘤分化水平更低。
　　 2．BMSCs微環(huán)境能誘導HT-29細胞發(fā)生EMT，影響HT-29細胞重要剪接因子的表達，并引起FGFR2、CD44和ENAH剪接方式的改變。<