1、分類號：Q9432密級：學校代碼：10057研究生學號：13808977基于amiRNA干擾技術改良亞麻薺脂肪酸組分的研究StudyonModificationofFattyAcidCompositioninCamelinasativabyArtificialMicroRNAInterferenceTechnology工程領域名稱：食品工程校內指導教師：王昌祿教授企業(yè)指導教師：沈國新研究員研究生姓名：李鵬程申請學位類別：工程碩士論文提交

2、日期：2016年03月論文課題來源：天津市外專局引智項目學位授予單位：天津科技大學摘要隨著人類化石能源逐漸耗盡，尋找新的可再生能源，維持人類生存和社會可持續(xù)發(fā)展勢在必行。生物燃料的發(fā)展能夠有效應對能源、環(huán)境、氣候變化等全球面臨的一系列重大問題。優(yōu)良原料的篩選是加速發(fā)展生物燃料產業(yè)的關鍵因素。亞麻薺具有抗旱、抗寒、耐瘠、耐鹽堿、抗病蟲害等優(yōu)良特性，是一種低投入油料作物，可應用于食品、飼料、工業(yè)等多種領域，發(fā)展?jié)摿薮?。但亞麻薺油的脂肪酸組

3、成不符合生物燃料所要求的具有更高的抗氧化能力、穩(wěn)定性和燃料特性，需要通過生物手段來提高其單不飽和脂肪酸一油酸含量。脂肪酸脫飽和酶(FAD2)和脂肪酸延長酶(FAEl)是兩種關鍵酶，分別促進多不飽和脂肪酸和長鏈不飽和脂肪酸的合成。本文利用人工微RNA(amiRNA)干擾技術，抑制FAD2和FAEl基因的表達，改良亞麻薺種子脂肪酸成分以更好的應用于生物燃料。該技術與方法同樣適用于改造亞麻薺用于食品原料各個領域。主要研究結果如下：通過設計莖環(huán)

4、引物，在亞麻薺根、莖、葉及種子(開花后20d)中成功克隆出2lbp長的CasmiRl59a基因，經實時熒光定量PCR分析，CasmiRl59a基因在種子中相對表達量最高(81)，在根中表達量最低(10)。克隆出CsFADEamiR干擾片段，將其插入到植物雙元表達載體PBinGlyRed2中，成功構建了pBinGlyRed2CsFADEamiR干擾載體，該植物表達載體以卡那霉素及紅色熒光蛋白(DsRed2)為篩選標記。以根癌農桿菌為介導菌

5、株，在亞麻薺開花初期及盛期，采用真空滲透轉化法將表達載體轉入野生型亞麻薺Suneson中，經綠光初篩，成功獲得20粒T1轉基因(紅)種子。采用氣相色譜法測定T2轉基因亞麻薺種子脂肪酸組成，轉基因種子中多不飽和脂肪酸(18：2與18：3)及長鏈脂肪酸(20：1)的含量降低，油酸(18：1)的含量增加，表明各轉基因株系的FAD2及FAEl基因表達得到有效抑制。篩選出最優(yōu)轉基因系T29，油酸相對含量由15％提高到32％；多不飽和脂肪酸的相對含