1、—— 坐塞查蘭堡主蘭堡墼 Y ! ! ! ! ! !分類號：密級：單位代碼：1 0 4 2 2學(xué) 號：2 0 0 3 1 1 4 1 10 ▲芰歲。暑碩士學(xué)位論文論文題目：s u s A 、g a l E 和t g t c 基因轉(zhuǎn)入煙草及轉(zhuǎn)基因植株糖分分析作者姓名張艷芳專 業(yè)細胞生物學(xué)指導(dǎo)教師姓名楊愛芳專業(yè)技術(shù)職務(wù)副教授2 0 0 6 年4 月2 0 日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要植物作為生物反應(yīng)器具有許多微生物、動物細胞培養(yǎng)系統(tǒng)所不具備的

2、優(yōu)點：1 ) 可對真核蛋白進行正確的翻譯后加工，形成有活性的分子；2 ) 不需要復(fù)雜的發(fā)酵產(chǎn)物后提取和分離、純化過程：3 ) 可利用自身豐富的底物，生產(chǎn)成本相對低廉；4 ) 不涉及公眾目前非常關(guān)心的有關(guān)轉(zhuǎn)基因動物倫理道德的問題和產(chǎn)品病毒污染等問題。因此，轉(zhuǎn)基因植物將成為一種新的潛力巨大的生物反應(yīng)器。迄今為止，已有大量的有關(guān)利用植物生產(chǎn)活性蛋白用于醫(yī)藥、食品、工業(yè)等領(lǐng)域的可行性文獻，也有利用植物生產(chǎn)高附加值碳水化合物和脂類的報導(dǎo)。植物通過

3、光合作用在葉中合成糖類物質(zhì)，然后從葉中轉(zhuǎn)移到根、( 塊) 莖、籽粒等貯存器官中，采用遺傳改良方法改變植物組織的糖代謝途徑。有可能使植物成為生產(chǎn)高附加值寡糖、多糖和糖蛋白的生物反應(yīng)器。G l o b o 廿i o s e 是一種具有重要價值的寡糖。在大腸桿菌中．它的合成需要3 個關(guān)鍵酶基因：1 ) s u s A ，編碼S u c r o s e s y n t h a s e ( E C 2 ．4 ．I ．1 3 ) ：2 ) g a

4、l E ．編碼U D P - g a l a c t o s e 4 - e p i m e r a s e ( E C5 ．1 _ 3 ．2 ) ；3 ) l g t C ，編碼小l ，4 - g a l a c t o s y l t r a n s f e r a s e( E C 2 ．4 ．1 ．x ) 。在植物中G l o b o t r i o s e 因缺少這三種酶而不能被合成。本工作擬將上述基因轉(zhuǎn)入模式植物煙草，探討利

5、用轉(zhuǎn)基因煙草合成G l o b o t r i o s e 的可能性。首先將上述基因分別正、反向克隆到植物表達載體p C A M B I A l 3 0 0 ．3 5 S ．T r i o s ．a(chǎn) ／s的印”I 位點，共得到6 個重組質(zhì)粒p l g t C ( + ，．) 、p g a l E ( + 厶) 和p s u s A ( + ，．) 。用攜帶上述質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化煙草無菌苗葉盤，在加有選擇劑的培養(yǎng)基上篩選后獲得轉(zhuǎn)化植株。對轉(zhuǎn)

6、化植株進行P C R 檢測和N o r t h e r n 雜交鑒定，證明外源基因已轉(zhuǎn)入煙草并活躍表達。對轉(zhuǎn)基因煙草植株的可溶性總糖分析發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)正義s u s A 基因的煙草植株可溶性糖含量比對照植株有一定提高，在檢測的4 個株系中，除1 個差異不顯著外，其余3 個株系均達差異顯著水平( P ≤O ．0 5 ) ：這3 個株系間可溶性糖含量雖有差異，但差異不顯著。轉(zhuǎn)反義s u s A 基因的煙草株系，其可溶性糖含量與對照株系相比，除1