1、該文研究CAUD啟動子煙草中的表達特性,對全長及5'序列部分缺失的啟動子的功能進行了初步的研究.該研究分為三個部分:"CAUD啟動子的同源序列比較","表達載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)基因煙草的獲得"以及"CAUD啟動子的功能分析".首先經(jīng)過同源序列比較,發(fā)現(xiàn)CAUD啟動子與GeneBank庫中的一個啟動子TAZ1有超過97％同源性,推測所克隆到的片段可能是TAZ1或類似啟動子.其次在研究中構(gòu)建了含有CAUD系列缺失啟動子,NOS終止子以及以Kan為

2、選擇標記,以GUS基因為報告基因的系列表達載體.表達載體經(jīng)酶切鑒定正確.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化煙草,利用Kan篩選培養(yǎng),獲得40余株Kan抗性苗,獲得PCR檢測陽性植株30余株.對其中15株系進行Southern雜交分析,結(jié)果表明CAUD啟動子已整合進煙草基因組中.論文最后對CAUD啟動子的功能進行了分析.對各個構(gòu)建轉(zhuǎn)化的不同株系的植株的各個器官進行GUS染色,發(fā)現(xiàn)除了pRDC-D構(gòu)建轉(zhuǎn)化的株系的花藥均可以染成藍色,花、莖、葉、根、

3、花瓣、花萼、花絲等均不能染成藍色.對照植株的花、莖、葉、根、花瓣、花萼、花絲、花藥等均不能染成藍色.為了明確轉(zhuǎn)基因植株花藥不同時期GUS基因表達情況,專門對花藥發(fā)育的各個時期進行染色,結(jié)果表明此啟動子不僅是花藥特異性啟動子,還是絨氈層表達的啟動子,具有時空表達的特異性.此啟動子表達部位與功能片段的確定對花藥特異性基因的表達模式研究具有理論意義.可以把此啟動子作為基因工程中的一個有用的表達調(diào)控元件.如此啟動子可用來作為創(chuàng)造雄性不育系的一個