1、隨著對糖尿病及其慢性并發(fā)癥研究的逐步深入，餐后高血糖(PPHG)和糖基化終產(chǎn)物(AGEs)在糖尿病并發(fā)癥中所起的作用已越來越受到重視。國內(nèi)外很多臨床醫(yī)學(xué)已經(jīng)十分關(guān)注血糖波動在糖尿病及其慢性并發(fā)癥中的危害作用，但是血糖波動的相關(guān)實驗研究報道較少，尤其是血糖波動動物模型的建立及葡萄糖濃度波動和AGEs聯(lián)合損傷血管細(xì)胞的研究都未見相關(guān)報道。本文的創(chuàng)新之處就是通過糖尿病小鼠血糖波動模型的建立來研究血糖波動對糖尿病小鼠臟器的影響，以及通過體外細(xì)胞

2、培養(yǎng)實驗研究葡萄糖濃度波動對血管細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的影響，同時還研究了葡萄糖濃度波動和AGEs的聯(lián)合作用對血管細(xì)胞損傷的影響，為進(jìn)一步深入探討血糖波動對糖尿病動物及血管細(xì)胞的損傷作用提供實驗依據(jù)。 本文將從以下幾個方面進(jìn)行研究： 1、血糖波動動物模型的建立：建立糖尿病小鼠的血糖波動模型，為研究和探討血糖波動的危害提供相關(guān)的動物模型。從正常的小鼠和四氧嘧啶(Alloxan)誘導(dǎo)的I型糖尿病模型小鼠中各隨機挑選出8只小鼠，實

3、驗分組為正常組、正常波動組、糖尿病模型組、糖尿病模型+波動組，模擬人一日三餐后的血糖波動情況。每天于8：00，12：00，16：00三次為正常波動組和糖尿病模型+波動組小鼠腹腔注射葡萄糖。每一周作一次小鼠全天的血糖監(jiān)測，四周后檢測各組小鼠的糖耐量和血清中果糖胺的含量。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射葡萄糖建立的血糖波動模型比較穩(wěn)定，方法簡單，重復(fù)性好；血糖波動后糖尿病小鼠糖耐量水平降低顯著，果糖胺水平則顯著增加。實驗結(jié)果說明以此方法建立的血糖波動

4、模型簡單可行，結(jié)果穩(wěn)定。 2、血糖波動對小鼠臟器的影響：以上述方法建立的血糖波動動物模型為實驗對象，實驗四周后檢測各組小鼠臟器的損傷情況。實驗結(jié)果表明，血糖波動使I型糖尿病小鼠的多個臟器都受到了不同程度的損傷，尤其是血糖波動后糖尿病模型+波動組小鼠臟器的損傷情況比糖尿病模型組小鼠明顯得多，說明血糖波動對糖尿病小鼠臟器的危害比持續(xù)高糖組更加嚴(yán)重。 3、葡萄糖濃度波動變化對血管細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)影響的研究：以體外培養(yǎng)的牛

5、胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞為實驗對象。通過光鏡和電鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，持續(xù)高糖和葡萄糖濃度的波動變化都會使血管細(xì)胞的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，而葡萄糖濃度波動對血管細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的影響更大，說明了細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變將引起細(xì)胞相關(guān)功能的改變。 4、葡萄糖濃度波動與糖基化終產(chǎn)物的聯(lián)合作用對血管細(xì)胞的損傷研究：以體外培養(yǎng)的牛胸主動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞為實驗對象。加入不同濃度的

6、葡萄糖、AGEs及葡萄糖濃度波動與AGEs的聯(lián)合作用作為損傷劑，利用生化方法測定細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量，用MTT法測定細(xì)胞的活性。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，不同濃度的葡萄糖組、AGEs組、葡萄糖濃度波動組以及聯(lián)合損傷組對主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用和對平滑肌細(xì)胞有明顯的促進(jìn)作用，主動脈血管細(xì)胞的LDH的泄漏率明顯增加，GSH、SOD的含量

7、減少，MDA、NO的含量增加；葡萄糖濃度波動組與單純的葡萄糖濃度組比較上述指標(biāo)的變化明顯；當(dāng)培養(yǎng)基中含有AGEs時，這種損傷進(jìn)一步加重，其中以聯(lián)合損傷組的作用最為明顯，說明葡萄糖濃度波動和AGEs的聯(lián)合作用對細(xì)胞的損傷最嚴(yán)重。 由此得出如下結(jié)論： (1)無論是正常小鼠還是I型糖尿病小鼠均能通過腹腔注射葡萄糖造成血糖波動模型，且此法簡單易行，重復(fù)性好； (2)血糖波動后糖尿病小鼠臟器的損傷更為嚴(yán)重； (3)