1、花生是我國重要的油料和經(jīng)濟作物；花生種子是花生的收獲目的物，生長在土壤中的花生種子很容易受到土壤病蟲害特別是黃曲霉菌的侵染，而嚴重影響花生產(chǎn)品的安全性。目前單純通過常規(guī)育種的方法提高花生的抗黃曲霉病性難度大，而通過基因工程技術則可有效解決問題；但是目前轉(zhuǎn)基因植物外源抗病基因的非特異性表達又帶來了食品安全性問題。本研究是在已分離到的果、種皮特異表達基因的基礎上，進一步分析這些基因在花生果皮、種皮和種仁等器官的不同發(fā)育階段的表達模式，以及在

2、其他不同器官的表達量，獲得只在果、種皮特異或豐富表達的基因；然后克隆花生果種皮特異表達啟動子，以便今后用于調(diào)控外源抗性基因只在果種皮中表達，而不在種仁中表達，確保轉(zhuǎn)基因花生食品的安全性。 1．利用半定量RT-PCR技術分析了13個基因在花生果皮、種皮和種仁等器官不同發(fā)育階段(10 d，20 d，30 d，40 d，50 d和60 d)的表達模式。13個果種皮基因中，有7個基因(8＃、9＃、13＃、16＃、8A4R19G1、PSC

3、11和1O10)在果種皮的擴增條帶亮于在種仁的，其他6個基因(12＃、14＃、2N22、4F2、5C22和9A4R19GZ)無明顯差異。通過比較7個基因在果、種皮各個時期的擴增條帶，最終獲得在果皮中豐富表達而在種仁中不表達的特異基因2個，即8＃和8A4R19G1。通過Blastn分析，其中8?；蚴枪δ芪粗?，8A4R19G1與陸地棉、粉藍煙草和油桐等植物的水通道蛋白有同源性。經(jīng)過推測氨基酸序列，預測8A4R19G1為主體水通道蛋白基

4、因。 2．利用半定量RT-PCR技術分析了8＃、9＃、13＃、16＃、8A4R19G1、PSC11和1O10在花生不同器官(根、莖、葉、花和果針)的表達量。結果表明：8＃、9＃、13＃、16＃、8A4R19G1分別在這些器官未見擴增條帶；PSC11和1O10各在根和葉中可見擴增條帶，在其它器官則未見擴增條帶。 3．根據(jù)已獲得的8A4R19G1基因序列，采用TaKaRa LA PCRTM in vitroCloning K

5、it克隆了其5'上游607bp核苷酸序列，通過生物信息學分析，在這個序列中找到了起始轉(zhuǎn)錄位點和一些基本啟動子元件CAAT-box、TATA-box等。在進一步獲得更長的啟動子后鑒定該啟動子的功能，將可在花生轉(zhuǎn)基因安全的前提下，提高花生莢果的抗黃曲霉病性。 4．采用5'RACE獲得花生PSC11基因的5'端序列。利用“Kozak”規(guī)則以及ORF Finder分析，找到了其起始位點ATG。為進一步獲得其啟動子序列奠定了基礎。目前，花