1、乳鐵蛋白（LTF）是一種分子量為80KD的可溶性鐵離子結(jié)合糖蛋白，屬于轉(zhuǎn)鐵蛋白家族一員，具有多種生物學功能，如抑制細菌生長、抗真菌、抗腫瘤、抗病毒及免疫調(diào)節(jié)。LTF特異性抗體是抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）的一種，常見于自身免疫性疾病患者血清中。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)RA患者血清中乳鐵蛋白免疫復合物（LTF-IC）的含量顯著升高，且從RA病人血漿置換液中純化的抗LTF抗體與LTF結(jié)合形成的免疫復合物在體外能夠活化人單核細胞釋放TNF-?

2、。應用兔抗LTF多克隆抗體L3262與LTF形成的免疫復合物也能夠強烈刺激人單核細胞釋放TNF-?、IL-1β、IL-8等。
　　為了對LTF-IC的免疫生物學活性做更為深入細致的研究，我們通過雜交瘤細胞融合技術(shù)制備了一株小鼠抗LTF的單克隆抗體，并證實該抗體與LTF形成的復合物同樣能夠誘導單核細胞釋放促炎性細胞因子。本課題就LTF-IC活化單核巨噬細胞的分子機制、信號轉(zhuǎn)導通路，尤其是 LTF-IC與病原體模式分子（LPS）之間的

3、協(xié)同作用機制進行探討，力爭發(fā)現(xiàn)RA發(fā)病的新機制，為尋找可用于臨床早期診斷的生物標志物和免疫治療的新靶點奠定基礎(chǔ)。
　　本研究的主要發(fā)現(xiàn)包括：（1）免疫復合物與LTF及LPS的協(xié)同作用誘導人單核細胞促炎性細胞因子的釋放，該過程依賴CD14，TLR4和FcγRⅡa的激活。（2)LTF-IC激活單核巨噬細胞過程有賴于脂筏結(jié)構(gòu)的完整和參與。通過共聚焦及提取脂筏發(fā)現(xiàn) LTF-IC可誘導相應受體募集至脂筏結(jié)構(gòu)，且脂筏破壞劑 M-β-環(huán)糊精（M

4、βCD）能夠抑制LTF-IC活化單核細胞釋放TNF-?。（3）固相化IgG協(xié)同LTF和 LPS作用的 mir-221-3p-SOCS1/SOCS3-p65通路。通過抑制劑干預以及western-blot方法發(fā)現(xiàn)LTF-IC活化單核細胞依賴FcγRⅡa下游的Src激酶和Syk激酶的活化，進而誘導 PI3K發(fā)生磷酸化，與 TLR4介導的信號通路共同激活下游MAPK以及NF-κB，但不依賴于對Akt的激活。
　　對比TLR4介導NF-κ

5、B信號通路的時間曲線，LTF-IC對NF-κB的激活在程度以及持續(xù)時間上均顯著增強，提示FcγRIIa介導的協(xié)同信號很可能影響了TLR4信號通路激活后相應的負調(diào)控基因的表達。進一步研究發(fā)現(xiàn)，LTF-IC處理細胞后TLR4下游的負調(diào)控基因 SOCS1、SOCS3顯著下調(diào)，這可能解除了這些負調(diào)控基因?qū)?NF-κB的負反饋調(diào)節(jié)，導致 p65的活化及延長磷酸化。高通量測序結(jié)果及Q-PCR驗證表明LPS或LTF協(xié)同c-IgG活化單核細胞能夠顯著上