1、G E N E T I C V A I U A T I O N A N A L Y S I S A N D D E V E L O P M E N ‘TO F I N D I R E C T E L I S A D I A G N O S T I C M E T H O D F O RP O R C I N E E P I D E M I C D I A R R H E A V I R U SB yZ h a i L u f e n g

2、S u p e r v i s o r ：P r o f ．L i uP e i h o n gP r o f ．Y a o H u o c h u nA D i s s e r t a t i o nS u b m i t t e dt o U b m i t t et ON a n j i n g A g r i c u l t u r a I U n i v e r s i t yI nP a r t i a l F u l f

3、' d l m e n t o f t h e R e q u i r e m e n tF o r t h eM a s t e r o f P r o f e s s i o n a l D e g r e ei nV e t e r i n a r yM e d i c i n eC o m p l e t e d i nM a y 2 0 1 5C o m m e n c e m e n t i nJ u n e 2 0

4、 1 5目錄目錄摘要} ????????????????????????????????????????????????????．IA B S T R A C T ??????????????????????????????????????????????．．I I I第一篇文獻(xiàn)綜述?????????????????????????????????．．1豬流行性腹瀉研究進(jìn)展???????????????????????????????1

5、1 豬流行性腹瀉概述?????????????????．?????????????12P E D V 的分類及形態(tài)?????????????????????????????．．13P E D V 的理化特性???????????????????????????????34 P E D V 的細(xì)胞培養(yǎng)特性????????????????????????????．．35P E D 的致病機(jī)理與病理變化????????????????????

6、??????．46P E D V 的基因組結(jié)構(gòu)和蛋白??????????????????????????．．46 ．1 復(fù)制酶基因與復(fù)制酶多聚蛋白l a b ?????????????????????56 ．2S 基因與S ( 纖突) 蛋白?????????????????????????56 ．3O R F 3 基因與O R F 3 蛋白?????????????????????????56 ．4E 基因與E ( 小膜) 蛋白????

7、?????????????????????66 。5 M 基因與M ( 膜) 蛋白?????????????????????????．66 ．6N 基因與N ( 核衣殼) 蛋白????????????????????????67P E D 診斷方法????????????????????????????????．77 ．1 病毒的分離與鑒定???????????????????????????．．77 ．2 免疫電鏡技術(shù)( I E M

8、) ?????????????????????????．．77 ．3 免疫熒光技術(shù)( F A T ) ??????????????????????????87 ．4 微量血清中和試驗(yàn)???????????????????????????．87 ．5 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( E L I S A ) ??????????????????????．．87 ．6 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)( P C R ) ????????????????????????．．

9、97 ．7 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)( L A M P ) ?????????????????????．．98P E D 疫苗的研究???????????????????????????????1 08 ．1 滅活疫苗???????????????????????????????1 08 ．2 弱毒疫苗???????????????????????????????1 08 ．3 基因工程疫苗??????????????????????????

10、???1 l9 研究目的與意義??????????????????????????????．．1 l參考文獻(xiàn)??????????????????????????????????。1 2第二篇研究?jī)?nèi)容?????????????????????????????????．1 9第一章2 0 1 4 年上海地區(qū)豬流行性腹瀉病毒基因變異分析????????????????1 91 實(shí)驗(yàn)材料?????????????????????????????

11、?????2 0I ．1 病料來(lái)源???????????????????????????????2 01 ．2 主要儀器設(shè)備?????????????????????????????2 01 ．3 主要試劑及試劑盒???????????????????????????2 02 實(shí)驗(yàn)方法?????????????????????????????????。2 12 ．1 引物設(shè)計(jì)與合成????????????????????????????