低溫脂肪酶生產(chǎn)菌篩選、基因克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá).pdf_第1頁
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1、脂肪酶（甘油酯水解酶，EC3.1.1.3）是一種特殊的甘油三酯水解酶，不僅能催化甘油三酯水解為甘油和脂肪酸，還能水解酯類，促進(jìn)酯交換和酯合成。在藥物合成、食品加工、洗滌劑和化妝品等行業(yè)領(lǐng)域都得到了廣泛應(yīng)用。
　　采用羅丹明B平板透明圈法對(duì)不同來源的樣品進(jìn)行篩選，共獲得55株脂肪酶生產(chǎn)菌株，其中菌株LHY-1具有生長(zhǎng)速度快、在低溫條件下產(chǎn)酶量高且穩(wěn)定的特點(diǎn)。菌株LHY-1的16S rDNA序列與嗜線蟲沙雷氏菌（Serratia ne

2、matodiphila）、粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）、深紅沙雷氏菌（Serratia rubidaea）、無花果沙雷氏菌（Serratia ficaria）序列相似性分別為99％、99％、98％、98％，根據(jù)生理生化分析，初步鑒定LHY-1為沙雷氏菌（Serratia sp.）。
　　對(duì)沙雷氏菌（Serratia sp.）LHY-1的生長(zhǎng)和產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化。菌株在前10h生長(zhǎng)迅速，10h后進(jìn)入穩(wěn)定期，最

3、佳產(chǎn)酶時(shí)間為16h。最適生長(zhǎng)和最佳產(chǎn)酶的碳源和氮源分別是牛肉膏、酵母粉。在10℃-40℃生長(zhǎng)良好，最佳產(chǎn)酶溫度為20℃。在初始pH為4.0-10.0范圍內(nèi)生長(zhǎng)良好，最佳產(chǎn)酶初始pH為7.0。該菌有著很高的耐鹽度，鹽度為9％時(shí)還生長(zhǎng)，但最佳產(chǎn)酶的鹽度為0。最適生長(zhǎng)和最適產(chǎn)酶的裝液量為30mL。
　　對(duì)沙雷氏菌（Serratia sp.）LHY-1的脂肪酶基因克隆和表達(dá)，重組脂肪酶用Ni瓊脂糖親和柱純化和SDS-PAGE檢測(cè)，該重組脂

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