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![固定化凝乳酶制備酪蛋白糖巨肽的初步研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/14/17/aac34737-ebc3-45d7-b6c9-9c55926f36cb/aac34737-ebc3-45d7-b6c9-9c55926f36cb1.gif)
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文檔簡介
1、酪蛋白糖巨肽(CaseinGlycomacropeptide,CGMP)是一種由凝乳酶(或胃蛋白酶)水解酪蛋白中κ-casein的Phe105-Met106的肽鍵得到的具有64個氨基酸殘基的短肽。CGMP具有多種生物活性。目前CGMP生產(chǎn)主要是從乳清中提取,由于乳清中乳糖、乳清蛋白等的存在,使大規(guī)模生產(chǎn)CGMP存在一定的技術(shù)困難。本文研究以酶解干酪素工藝生產(chǎn)CGMP,并對酶解工藝中的凝乳酶進行固定化研究,降低工業(yè)成本,同時利用多種方法分
2、離提純CGMP,獲得不同純度的CGMP的制備工藝。
凝乳酶的固定化工藝根據(jù)單因素實驗結(jié)果,采用Minitab軟件對影響固定化凝乳酶的主要因素進行了篩選,結(jié)果表明加酶總量、固定化時間、戊二醛濃度對凝乳酶固定化有顯著影響。根據(jù)Minitab的分析結(jié)果,采用DesignExpert軟件中響應面設計及分析對酶解主因素進行了優(yōu)化,經(jīng)軟件分析預測優(yōu)化后,并根據(jù)實際條件最終確定戊二醛濃度為13%,酶總量200mg/(g載體),交聯(lián)化時間3h
3、,固定化時間50min。
對固定化凝乳酶的酶學性質(zhì)和穩(wěn)定性進行了測定,其最適溫度55℃、最適pH為5.5,具有很好的穩(wěn)定性。固定化酶活力回收率達到26.59%。通過對固定化酶與游離酶生產(chǎn)CGMP的比較,發(fā)現(xiàn)酶解干酪素的上清液中CGMP的含量沒有明顯差異。可重復使用6次,說明該固定化凝乳酶具有良好的操作穩(wěn)定性。保存2個月的酶活仍在80%以上,具有很好的工業(yè)化應用潛力。
在酪蛋白糖巨肽的分離純化部分,考察了膜過濾分離方法
4、與離子交換層析的最佳條件。結(jié)果表明以截留量為5000Da的超濾膜,確定了超濾壓力為0.03Mpa,pH值7。篩選出陰離子交換樹脂D280對CGMP進行分離純化,上樣量1/10BV,pH為6.5,洗脫流速1BV/h,0.4,0.6,1.0mol/L的NaCl沈脫梯度,各梯度洗脫體積為1.5BV,其中CGMP被洗脫濃度為0.6mol/L的NaCl,酪蛋白糖巨肽的回收率可以達到75.68%。通過不同的分離方法,在確定的最佳條件下,經(jīng)過噴霧干燥
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