1、荔枝是華南地區(qū)特色水果,其果香獨(dú)特、營養(yǎng)豐富,具有顯著的滋補(bǔ)功效。現(xiàn)代研究表明,荔枝果肉具有抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫等活性作用,而荔枝果肉活性多糖被證實(shí)是其具有保健作用的重要物質(zhì)基礎(chǔ)之一。本文通過優(yōu)化荔枝果肉多糖的超聲微波酶解協(xié)同提取工藝,比較了此方法與傳統(tǒng)熱水法提取的荔枝多糖的體外抗氧化活性、免疫調(diào)節(jié)活性及其結(jié)構(gòu)特征差異；確定荔枝多糖離子層析分級(jí)條件,比較其組分體外抗氧化活性、免疫調(diào)節(jié)活性,并初步解析其基本結(jié)構(gòu),為荔枝制品尤其為功能食

2、品的開發(fā)及應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。論文的主要研究結(jié)果如下:
　　 1.超聲微波酶解協(xié)同提取荔枝多糖:采用響應(yīng)面法分析設(shè)計(jì)五因素三水平試驗(yàn),優(yōu)化荔枝果肉多糖的超聲微波酶解協(xié)同提取工藝。經(jīng)分析并結(jié)合驗(yàn)證試驗(yàn),確定荔枝多糖的最佳提取工藝條件為:纖維素酶(酶活為30U/nag)添加量14mg/g(與底物之比),料液比1:10,溫度49℃,pH值4.8,提取時(shí)間12min。在該條件下,荔枝多糖得率可達(dá)23.31％,比傳統(tǒng)熱水法、超聲法、微波法分別提

3、高18.95％、4.37％和17.10％(P<0.05)。
　　 2.超聲微波酶解協(xié)同法與熱水法提取荔枝多糖的活性比較及結(jié)構(gòu)初析:比較兩利方法提取荔枝多糖(LCP)體外還原Fe3+能力、清除DPPH自由基、ABTS自由基的結(jié)果顯示,超聲微波酶解法提取的LCP清除DPPH·和ABTS+的IC50分別為427μg/mL、203μg/mL,顯著低于同濃度下熱水法提取的LCP清除DPPH·和ABTS·+的IC50(2734μg/mL、1

4、590μg/mL,P<0.05)；FRAP抗氧化值為0.32μmol/mg,顯著高于熱水法提取LCP的FRAP值(0.16μmol/mg,P<0.01),表明超聲微波酶解法提取LCP的抗氧化能力顯著高于熱水法提取的LCP。同時(shí),細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明,超聲微波酶解法提取的LCP促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞殺傷能力的活性顯著(P<0.05)高于熱水法提取的LCP。
　　 對(duì)兩種方法提取的LCP特性分析的結(jié)果表明,超聲微波酶法提取的

5、LCP水溶性多糖含量為57.26％,糖醛酸含量為12.39％；熱水法提取的LCP水溶性多糖的含量47.62％,糖醛酸的含量23.69％;紅外光譜、氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)、凝膠色譜的分析結(jié)果顯示,超聲微波酶法提取的LCP為具鹵素取代的α-吡喃型多糖,由木糖、鼠李糖、核糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖等單糖組成(摩爾比為1:4.39:6.05:16.07:65.20:23.62:15.25),分子量為7.92×104和9.09×1

6、03；熱水法提取的LCP為具O-糖苷鍵結(jié)合的有蛋白的多糖,由木糖、鼠李糖、核糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖等單糖組成(摩爾比為1:2.59:5.77:8.13:22.49:22.50:26.02),分子量為6.01×104。兩種方法提取LCP的水溶性多糖含量、單糖組成和分子量的差異可能是造成其活性差異的基礎(chǔ)。
　　 3.層析條件優(yōu)化及級(jí)分分離:優(yōu)化荔枝多糖DEAE-52離子層析的分級(jí)條件,確定其最適分級(jí)條件為:上樣濃度為4

7、.2mg/ml,上樣體積為8ml,柱流速為1ml/min,徑長比為1:30,上樣重復(fù)利用兩次,梯度洗脫液為0.1 mol/LNaCl,0.2 mol/LNaCl,0.3mol/LNaCl和0.3mol/LNaOH。采用該方法對(duì)提取的荔枝粗多糖進(jìn)行分級(jí)純化,得到LCP1～5五個(gè)組分,洗脫率為91.10％:0.78％:0.42％:0.11％:1.09％。
　　 4.荔枝多糖主級(jí)分的生物活性及其結(jié)構(gòu)特征比較:選取DEAE-52層析分離

8、純化得到的主組分LCP1和LCP5,比較其FRAP抗氧化活性及促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖、NK細(xì)胞殺傷的能力。結(jié)果顯示,LCP5的FRAP抗氧化活性(1.281μmol/mg)顯著高于LCP1(0.136μmol/mg,P<0.05)。同時(shí),LCP5促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞增殖活性顯著強(qiáng)于LCP1(P<0.01)；在濃度為300μg/mL和400μg/mL時(shí),其促進(jìn)NK細(xì)胞殺傷能力的活性顯著高于LCP1(P<0.05)。對(duì)其理化特性分析的結(jié)果顯示,LCP

9、1的水溶性多糖含量為63.16％,糖醛酸含量為32.36％,紫外光譜分析顯示其含有少量核酸和蛋白質(zhì)；LCP5的水溶性多糖含量為42.84％,糖醛酸含量為10.82％。紅外光譜、GC-MS和高效凝膠滲透色譜的分析結(jié)果顯示,LCP1為具端炔基酸性多糖,由核糖、鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖按1:1.58:2.66:4.97:9.15:11.14構(gòu)成,其數(shù)均分子量為5.45×104；LCP5為具鹵素取代的α-吡喃型酸性多糖,由核糖、