轉(zhuǎn)基因大豆在貯藏和加工過程中外源epsps成分變化規(guī)律的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、epsps(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)基因是美國孟山都公司開發(fā)的轉(zhuǎn)基因大豆中抗草甘膦的靶基因,它與莽草酸途徑密切相關(guān)。自從轉(zhuǎn)基因問世以來,轉(zhuǎn)基因作物種類不斷增加,導(dǎo)致人們對轉(zhuǎn)基因的安全,特別是轉(zhuǎn)基因食品的安全越來越擔(dān)心,因此世界各國都對轉(zhuǎn)基因食品的溯源和標(biāo)識越來越關(guān)注。
   有相關(guān)報(bào)道證明,轉(zhuǎn)基因外源成分在食品加工過程中受到各種不同的加工因素的影響。因此,本文采用PC

2、R、蛋白質(zhì)印跡的方法進(jìn)一步研究大豆中epsps成分在儲藏、加工過程的變化。
   試驗(yàn)一轉(zhuǎn)基因大豆粉在真空和普通環(huán)境(4℃、25℃、37℃)的條件下儲藏一段時間(10、30、50、70、90 d)后,分析其外源epsps成分的變化情況。結(jié)果顯示,真空包裝的大豆粉中轉(zhuǎn)基因蛋白有輕微降解,核酸基本沒有變化;普通包裝樣品,25℃儲藏的大豆粉的基因和蛋白在50天時發(fā)生明顯降解,37℃時發(fā)生降解的情況稍微延遲。在整個過程中,蛋白檢測結(jié)果顯

3、示,穩(wěn)定性:外源蛋白的中間和羧基端>氨基末端;核酸檢測結(jié)果顯示,穩(wěn)定性:35S啟動子<nos終止子和epsps(517-854區(qū)間)。結(jié)合兩種儲藏環(huán)境,對比結(jié)果可以發(fā)現(xiàn),在儲藏過程中,對epsps基因和蛋白的影響:濕度>溫度。
   試驗(yàn)二大豆分離蛋白作為肉品中重要添加劑之一,存不存在轉(zhuǎn)基因成分與功能食品和肉制品密切相關(guān)。因此,本試驗(yàn)通過試驗(yàn)一建立的方法對江蘇周邊地方市售的大豆分離蛋白進(jìn)行調(diào)查,發(fā)現(xiàn)在所檢測的5個城大豆分離蛋白中

4、至少有2種以上的大豆分離蛋白存在轉(zhuǎn)基因成分。試驗(yàn)結(jié)果表明,市售的轉(zhuǎn)基因大豆分離蛋白中,DC-16抗體所對應(yīng)的蛋白區(qū)域較為穩(wěn)定(降解條帶為46.5 kD,41.9kD,35.5kD),核酸1111-1429bp之間的序列穩(wěn)定性較好,且半定量檢測靈敏度較高。
   試驗(yàn)三為了進(jìn)一步研究大豆分離蛋白在整個肉品加工過程中的變化過程,本試驗(yàn)采用河南安陽生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因大豆分離蛋白按8%的質(zhì)量比添加到香腸中,并分步(腌制、烘烤、蒸煮、滅菌)取樣

5、,研究轉(zhuǎn)基因大豆分離蛋白在加工香腸中的變化情況。研究發(fā)現(xiàn),加工過程中的不同的加工條件對大豆分離蛋白的純度以及Western-Blot技術(shù)局限性的存在影響,且轉(zhuǎn)基因大豆分離蛋白在肉制品中最低的含量檢測限為2%(wt/wt)。同時經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn),在試驗(yàn)二中能夠檢測到的降解條帶在加工過程中由于使用量和加工因素的影響,難以用Western-Blot的方法檢測,同時對比三個抗體可以發(fā)現(xiàn),DC-17抗體和CK-17抗體檢測靈敏度較高,在整個加工過程中

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