1、目的：①分離、篩選出具有較高轉(zhuǎn)酯活性的產(chǎn)脂肪酶酵母菌，并優(yōu)化其產(chǎn)酶培養(yǎng)條件。②利用全細(xì)胞催化方法，催化合成生物柴油，并分析其催化特性。 方法：⑴以橄欖油為唯一碳源進(jìn)行富集培養(yǎng)，以Rhodamine B為指示劑進(jìn)行平板篩選，得到產(chǎn)脂肪酶菌株；利用滴定法、平板擴(kuò)散法以及進(jìn)行轉(zhuǎn)酯反應(yīng)實驗，最終篩選出具有轉(zhuǎn)酯活性脂肪酶的菌株；同時初步優(yōu)化其中一株酵母菌的培養(yǎng)條件。⑵利用篩選出的酵母菌作為催化劑，以叔丁醇為溶劑，全細(xì)胞催化橄欖油與碳酸二甲

2、酯反應(yīng)生產(chǎn)生物柴油。⑶利用酸熱法提取部分產(chǎn)油脂酵母的油脂，并催化其生成生物柴油。 結(jié)果：①進(jìn)行了大量的產(chǎn)脂肪酶酵母菌的篩選工作。以橄欖油為唯一碳源，利用Rhodamine B作為指示劑進(jìn)行了平板篩選實驗，從新疆石河子地區(qū)10分土樣中，篩選到了90株有脂肪酶活性的酵母菌。滴定法測量野生菌株脂肪酶活力，每1mL培養(yǎng)液脂肪酶活力：1.1-6.6U。其中B9，C1，E7，F(xiàn)12等有成為生物催化劑的潛力。擴(kuò)增了其中脂肪酶活性較高的9株的1

3、8s rDNA，測序后BLAST并進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹分析，結(jié)果表明所得菌株分別與Candida.，Rhodotorula.，Trichosporon.等屬親緣關(guān)系接近。將其中6條18s rDNA序列登錄GenBank（FJ538165-FJ538170）。②對篩選到的菌株F12液體搖瓶生產(chǎn)脂肪酶的條件進(jìn)行了優(yōu)化。確定其最適產(chǎn)酶條件如下，每1L培養(yǎng)基：橄欖油+蔗糖（10：1）混合碳源20.0g，蛋白胨60.0g，K2HPO41.0g，MgSO

4、40.5g，pH7.0；培養(yǎng)溫度為30℃，搖床轉(zhuǎn)速200r/min，搖瓶裝樣量為50mL（250mL三角瓶），接種1mL，最佳培養(yǎng)時間48h。③優(yōu)化菌株F12產(chǎn)酶條件后，F(xiàn)12脂肪酶活力由最初的4.95U/mL提高到16.0U/mL增幅223％。以叔丁醇為溶劑，全細(xì)胞催化橄欖油與碳酸二甲酯反應(yīng)生成了脂肪酸甲酯，即生物柴油。④在篩選到的產(chǎn)脂肪酶酵母中發(fā)現(xiàn)了若干積累油脂的菌株，提取了其中兩株酵母菌的細(xì)胞內(nèi)油脂，并利用其作為原料，反應(yīng)生成生物

5、柴油。實驗表明，部分菌株同時具有脂肪酶催化能力和積累油脂的能力。 結(jié)論：⑴篩選出若干具有脂肪酶活性的酵母菌，初步鑒定，所得菌株分別與Candida.，Rhodotorula.，Trichosporon.等屬親緣關(guān)系接近。其中B9，C1，E7，F(xiàn)12等菌株具有轉(zhuǎn)酯活性，有成為生物催化劑的潛力。⑵通過對產(chǎn)酶條件的優(yōu)化，使菌株F12活力增長到16.0U/mL；在以叔丁醇作為溶劑的體系中，全細(xì)胞催化橄欖油與碳酸二甲酯反應(yīng)生成生物柴油。⑶