1、雙氫青蒿素（dihydroartemisilun，DHA）為抗瘧藥青蒿素的衍生物，具有比青蒿素更強(qiáng)的抗瘧活性。其分子式為C15H24Os，分子量為284．35，熔點(diǎn)為145～150℃，熔融時同時分解；在三氯甲烷中易溶，在丙酮中溶解，在甲醇或乙醇中略溶，在水中幾乎不溶。 經(jīng)皮給藥系統(tǒng)（transdermal drug delivery system，TDDS）是指藥物以一定的速率通過皮膚，經(jīng)毛細(xì)血管吸收進(jìn)入體內(nèi)血液循環(huán)，從而產(chǎn)生藥

2、效的一類制劑。TDDS具有與其它傳統(tǒng)口服制劑無法比擬的優(yōu)點(diǎn)。它不僅可以避免肝臟“首過效應(yīng)”，降低毒副作用，而且可以減少給藥劑量，降低血藥峰濃度，縮短治療療程。由于臨床上雙氫青蒿素片口服劑量大，療程長，復(fù)燃率高。為此，選擇將其制成經(jīng)皮給藥制劑。先是對DHA貼劑進(jìn)行研究，但DHA透皮速率很小，因此研發(fā)DHA貼劑的難度較大。為此，選擇DHA軟膏及凝膠進(jìn)行研究。 本論文研究了DHA軟膏和凝膠處方與體外滲透性，對DHA凝膠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研

3、究，并對其進(jìn)行了藥效與安全性評價。 1．處方前研究在處方前研究中，采用HPLC法測定了DHA油水分配系數(shù)、溶解度。結(jié)果以正辛醇為油相，超純水為水相的DHA油水分配系數(shù)logP=2．6768，表明DHA脂溶性較大。在PEG400溶液，生理鹽水，乙醇/生理鹽水等溶液中，DHA在40%PEG400溶液中的溶解度最大，為（0．5128±0．0014）mg/ml。但在體外透皮試驗(yàn)篩選接收液中，以乙醇/生理鹽水（2：8）為接收液中DHA的濃

4、度能夠達(dá)到HPLC檢測限的要求，DHA穩(wěn)態(tài)滲透速率顯著增加（P<0．05），達(dá)到（29．14±4．6789）mg/ml，為此選擇乙醇/生理鹽水（2：8）為接收液。通過DHA體外透皮試驗(yàn)方法學(xué)考察，建立了一種DHA的含量測定方法。預(yù)柱PhenomenexC18（4mm×3．0mm），色譜柱KromasilC18柱（250mm×4．6mm，5μm），流動相為乙腈—水（60：40），流速1．0ml/min，檢測波長216nm，柱溫25℃。結(jié)果

5、顯示該法精密度好，RSD為0．64%；準(zhǔn)確度高，回收率為97．02%；DHA在0．25325～10．13μg的范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=31170．7799X—1355，1672，r=0．9999；供試品溶液在分析濃度下，45小時內(nèi)基本穩(wěn)定。結(jié)果表明以乙醇/生理鹽水（2：8）為接收液建立的體外透皮試驗(yàn)方法穩(wěn)定、可靠，適用于DHA經(jīng)皮給藥系統(tǒng)的體外透皮試驗(yàn)研究。 2．處方研究 選擇油溶性、乳膏等

6、3種軟膏基質(zhì)和水溶性凝膠基質(zhì)分別制成DHA軟膏，經(jīng)過體外透皮試驗(yàn)，結(jié)果以卡波姆等基質(zhì)制成的水溶性DHA凝膠的DHA穩(wěn)態(tài)滲透速率最大，為（18．351±8．257）μg/（h．c㎡），故選擇由卡波姆等組成的基質(zhì)為DHA的處方。在促滲劑篩選中，含3%氮酮的DHA凝膠增滲倍數(shù)最高，為不含促滲劑的2．52倍，而含5%氮酮的DHA凝膠滲透速率比3%氮酮的大，故選擇5%氮酮為DHA凝膠的促滲劑。對載藥量進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)載藥量為10%的DHA穩(wěn)態(tài)滲透速

7、率最大，故選擇10%的DHA載藥量。但在安全性試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)含5%氮酮的DHA凝膠對家兔皮膚有刺激性。可能由于氮酮使DHA促滲作用增強(qiáng)而產(chǎn)生刺激性。為此，在DHA凝膠中不加入促滲劑，進(jìn)行防腐劑篩選，通過安全性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其不會對家兔產(chǎn)生皮膚刺激性，DHA凝膠6個月內(nèi)沒有出現(xiàn)霉變等現(xiàn)象，因而確定DHA凝膠的防腐劑為0．1%尼泊金乙酯。 3．質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 DHA凝膠是一種微具特殊氣味的混懸型乳白色凝膠。采用pH計測定DHA凝膠酸堿

8、度，結(jié)果表明其接近中性。在顯微鏡檢查DHA凝膠粒度時，沒有發(fā)現(xiàn)大于180μm的粒子。其他鑒別和檢查均能符合2005年版《中國藥典》第二部項下有關(guān)規(guī)定。采用HPLC法對DHA凝膠進(jìn)行方法學(xué)考察，建立了一種DHA的含量測定方法。預(yù)柱PhenomenexC18（4mm×3．0mm），色譜柱KromasilC18柱（250mm×4．6mm，5μm），流動相為乙腈—水（60：40），流速1．0ml/min，檢測波長216nm，柱溫25℃。結(jié)果顯示

9、該法精密度好，RSD為0．34%；準(zhǔn)確度高，回收率為100．08%；DHA在1．0005～40．02μg的范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=29．403X—3．0169，r=1；供試品溶液在分析濃度下，24小時內(nèi)基本穩(wěn)定。結(jié)果表明該法檢測DHA的專屬性強(qiáng)，避免了因DHA衍生化反應(yīng)不完全而引入的誤差，簡化了操作，縮短了分析時間，所建HPLC法簡便、快速、準(zhǔn)確，適用于DHA凝膠的含量測定及穩(wěn)定性研究。 4．藥效及

10、安全性研究 以卡波姆等為基質(zhì)，0．1%尼泊金乙酯為防腐劑，載藥量為10%，制成DHA凝膠，進(jìn)行藥效學(xué)和安全性試驗(yàn)。采用Peters法和4d抑制性試驗(yàn)法進(jìn)行小鼠抗瘧試驗(yàn)，DHA凝膠小劑量17．5mg/kg/d就能使小鼠全部轉(zhuǎn)陰并且沒有復(fù)燃，治愈率達(dá)到100%。用家兔進(jìn)行皮膚刺激性試驗(yàn)和豚鼠進(jìn)行皮膚過敏性試驗(yàn)，涂抹約含310．8mgDHA的凝膠后無一只家兔皮膚出現(xiàn)紅斑和水腫；在過敏性試驗(yàn)中，涂抹約含138．88mgDHA的凝膠在除去

11、藥物1h和24h后，分別有1只豚鼠出現(xiàn)輕微的過敏反應(yīng)。結(jié)果表明，DHA凝膠對家兔的皮膚無明顯刺激性，對豚鼠皮膚為弱致敏性。 綜上所述，利用高分子材料卡波姆等水溶性基質(zhì)制得的DHA凝膠經(jīng)皮給藥能夠達(dá)到殺滅瘧原蟲的作用。其創(chuàng)新之處體現(xiàn)在以下幾個方面： （1）目前未查到雙氫青蒿素經(jīng)皮給藥處方及體外滲透性研究的相關(guān)文獻(xiàn)，為此本研究首次報道了雙氫青蒿素的體外經(jīng)皮給藥研究，填補(bǔ)了國內(nèi)外的空白。 （2）DHA凝膠的制備工藝簡單