1、研究目的:
　　構(gòu)建針對C/EBP-β慢病毒質(zhì)粒;轉(zhuǎn)染肝癌細胞株SMMC-7721，篩選并培養(yǎng)穩(wěn)定干擾C/EBP-β表達的SMMC-7721細胞株;進一步研究沉默C/EBP-β對肝癌細胞株SMMC-7721的細胞增殖、凋亡、遷移、細胞周期蛋白表達的影響。
　　研究方法:
　　1.利用慢病毒介導(dǎo)RNAi技術(shù)，設(shè)計針對C/EBP-β及eGFP（對照）shRNA序列，分別裝入pLKO.1-TRC質(zhì)粒，進行慢病毒包裝，構(gòu)建針對

2、C/EBP-β和eGFP的慢病毒質(zhì)粒，提取質(zhì)粒并測序。
　　2.將已包裝成功的sh-C/EBP-β和sh-eGFP慢病毒轉(zhuǎn)染SMMC-7721，嘌呤霉素篩選并培養(yǎng)針對C/EBP-β穩(wěn)定干擾的細胞株SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β及針對eGFP穩(wěn)定干擾的細胞株SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP。Western Blot分別檢測兩組細胞C/EBP-β的表達情況。
　　3.CCK8法檢測沉默C/EBP-

3、β基因?qū)Ω伟㏒MMC-7721細胞增殖的影響。
　　4.Western Blot檢測沉默C/EBP-β基因?qū)Ω伟㏒MMC-7721細胞周期蛋白Cyclin B1表達的影響。
　　5.Western Blot檢測沉默C/EBP-β基因?qū)Ω伟㏒MMC-7721細胞抗凋亡蛋白Bcl-2及凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達影響。
　　6.劃痕實驗及Transwell遷移實驗檢測沉默C/EBP-β基因?qū)MMC-7721遷移能力的影響。<

4、br>　　研究結(jié)果:
　　1.本實驗包裝的sh-C/EBP-β和sh-eGFP慢病毒具有感染肝癌SMMC-7721細胞細胞系能力，獲得了針對C/EBP-β基因的穩(wěn)定干擾細胞株SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β，針對eGFP基因的穩(wěn)定干擾細胞株SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP。
　　2.Western Blot檢測顯示:與對照組SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP相比，pLKO-sh-C/E

5、BP-β慢病毒可顯著抑制SMMC-7721細胞內(nèi)C/EBP-β的表達（P＜0.05）。
　　3.CCK8法檢測顯示:與對照組SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP相比，實驗組SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β的增殖速度顯著提高(相對增值率136.8％，P＜0.05)。
　　4.Western Blot檢測顯示:與對照組SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP相比，實驗組SMMC-7721-pLKO-

6、sh-C/EBP-β的周期蛋白Cyclin B1表達增強(P＜0.05)。
　　5.Western Blot檢測顯示:與對照組SMMC-7721-pLKO-sh-eGFP相比，實驗組SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β促進了抗凋亡蛋白Bcl-2表達(P＜0.05)并抑制凋亡相關(guān)蛋白Bax的表達(P＜0.05)。
　　6.劃痕實驗及Transwell遷移實驗顯示:與對照組SMMC-7721-pLKO-sh-eGF

7、P相比，實驗組SMMC-7721-pLKO-sh-C/EBP-β的遷移能力明顯增強，遷移抑制率為-292.3％（P＜0.05）。
　　研究結(jié)論:
　　本實驗成功構(gòu)建pLKO-sh-C/EBP-β載體，并篩選出沉默C/EBP-β的穩(wěn)定干擾細胞株;沉默C/EBP-β對肝癌細胞SMMC-7721的增殖、遷移有促進作用，對其凋亡有抑制作用，且其細胞周期蛋白Cyclin B1表達升高。為初步闡明C/EBP-β在腫瘤發(fā)生發(fā)展機制中的角色