1、中山大學(xué)766733碩士學(xué)位論文大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞及移植治療腦梗塞模型鼠的研究答辯委員會(huì)主席：答辯委員會(huì)成員：專業(yè)：碩士研究生：導(dǎo)師：病理生理學(xué)王穎鄧宇斌教授教授教授教授教授教授2005年5月廣州礙ok癭仆藤簇參侈廠爭(zhēng)葉亂叼中山大學(xué)碩==學(xué)位論文大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞及移植擼療腦梗塞模型鼠的研究前研究的熱點(diǎn)。目前，已有研究將MSCs及由其誘導(dǎo)的神經(jīng)元樣細(xì)胞用于多種心腦血管疾病的治療，如心肌梗死

2、、缺血缺氧性腦病等。以上研究為將由MSCs誘導(dǎo)分化的神經(jīng)元樣細(xì)胞用于治療腦梗塞帶來(lái)曙光和生機(jī)，深入探討MSCs分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞對(duì)損傷腦組織的修復(fù)以及其功能恢復(fù)的機(jī)制，進(jìn)而評(píng)估其有效性、安全性和可靠性，具有積極的臨床意義。那么將由骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化而來(lái)的神經(jīng)元樣細(xì)胞局部立體定位注射于腦梗塞部位能否夠在功能上替代、彌補(bǔ)已損失腦部神經(jīng)元的功能能否有效促進(jìn)腦梗塞模型鼠的肌力、平衡能力等整體運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)以及能否促進(jìn)其學(xué)習(xí)及記憶能力的恢復(fù)

3、上述功能恢復(fù)的水平有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義本研究擬于針對(duì)此目的應(yīng)用干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，應(yīng)用丹參酮IIA誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為神經(jīng)元樣細(xì)胞，制作大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞模型，通過(guò)大腦局灶立體定位注射誘導(dǎo)細(xì)胞，應(yīng)用神經(jīng)學(xué)評(píng)分、運(yùn)動(dòng)功能檢測(cè)、學(xué)習(xí)記憶功能檢測(cè)、病理學(xué)檢測(cè)及免疫組化和熒光相結(jié)合的方法探討神經(jīng)元樣細(xì)胞移植對(duì)腦梗塞模型鼠神經(jīng)功能恢復(fù)的影響。本課題的研究包括以下三部分：第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)于細(xì)胞的分離、擴(kuò)增與鑒定1方法頸椎脫

4、臼處死大鼠后，75％酒精消毒，于超凈工作臺(tái)無(wú)菌條件下取其兩只股骨，剪除一側(cè)骨垢端，暴露骨髓腔，用一次性注射器吸取lml15ml全培養(yǎng)液反復(fù)沖洗骨髓腔，沖出其中的骨髓細(xì)胞于平皿中，將收集的細(xì)胞懸液反復(fù)用注射器輕輕抽吸數(shù)次，將其打散成單細(xì)胞懸液，然后收集細(xì)胞離心，棄盡上液，用LDMEM(15％FBS)培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，將其接種于25cm2的塑料培養(yǎng)瓶中，密度為每瓶2X107個(gè)細(xì)胞，略旋松瓶口，放置二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置原代培養(yǎng)。待rMSCs