1、目的：Alzheimer病是一類原發(fā)退行性灰質(zhì)腦病，潛隱起病，進(jìn)行性發(fā)展。AD病程長(zhǎng)達(dá)20年左右，晚期AD患者常有嚴(yán)重的精神和神經(jīng)癥狀，生活完全不能自理，嚴(yán)重影響老年人的建康并造成了嚴(yán)重的社會(huì)與經(jīng)濟(jì)問(wèn)題。目前，在臨床上尚無(wú)針對(duì)其發(fā)病機(jī)制的西醫(yī)特效藥。根據(jù)中醫(yī)的理論及實(shí)驗(yàn)，認(rèn)為AD的病機(jī)是本虛標(biāo)實(shí)。本虛主要為腎精虧損和氣血不足；標(biāo)實(shí)主要為痰濁阻竅，氣滯血瘀。歷代中醫(yī)分別采用補(bǔ)腎益髓添精，養(yǎng)心安神，補(bǔ)脾益氣，豁痰開(kāi)竅，行氣活血等治法應(yīng)用于臨

2、床，獲得可靠療效。開(kāi)心散是根據(jù)臨床實(shí)踐結(jié)合實(shí)驗(yàn)研究，選出的有效方劑?，F(xiàn)多用于治療老年癡呆，神經(jīng)衰弱等。臨床上開(kāi)心散始見(jiàn)于《備急千金要方》由遠(yuǎn)志，人參，茯苓，菖蒲組成。為益氣養(yǎng)心，安神定志之代表方劑。開(kāi)心散為中藥方劑，可以發(fā)揮其神經(jīng)藥理活性的多樣性，通過(guò)不同的途徑，作用于多靶點(diǎn)，從而發(fā)揮其建腦促智作用。 本研究初步探索了開(kāi)心散對(duì)Alzheimer病大鼠模型的作用機(jī)制。 方法： (1)老年癡呆大鼠的模型制作：

3、 參照大鼠腦立體定位圖譜具體操作如下：Aβ組，每只大鼠稱重后進(jìn)行腹腔麻醉(戊巴比妥40mg/kg)后，固定于腦立體定位儀上，剪去頭頂部的毛，消毒后取頭頂部正中線切開(kāi)頭皮(矢狀切口)，分離皮下組織充分暴露出前囟及其周圍部分的顱骨，鉆穿顱骨，注射器針頭挑破硬腦膜.將溶液抽入微量進(jìn)樣器中，按如下位點(diǎn)進(jìn)行定位注射：前囟前0.5mm,腦正中線右側(cè)2.8mm硬腦膜下7.0mm進(jìn)針至Meynert核.使Aβ-25-35溶液1μ1在5分鐘內(nèi)緩慢注完，注

4、射完畢后留針5分鐘，使殘余在進(jìn)樣器末端的液體被充分吸收，然后緩緩拔出進(jìn)樣器，縫合頭皮包扎傷口，將動(dòng)物放回飼養(yǎng)籠內(nèi)。術(shù)后給予青霉素8萬(wàn)u/只，Ⅰ次/天，共3天。預(yù)防感染.連續(xù)給藥28天，第29天開(kāi)始，進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練5天，記錄第5天的逃避潛服期，明顯高于假手術(shù)組，說(shuō)明造模成功。 (2)開(kāi)心散治療Aβ25-35誘導(dǎo)大鼠AD的實(shí)驗(yàn)： 將60只大鼠，隨機(jī)分為Aβ組，低劑量開(kāi)心散治療組，高劑量開(kāi)心散治療組，腦復(fù)康治療組，假手術(shù)組，共

5、5組，每組12只。假手術(shù)組大鼠右側(cè)Meynert基底核注射1ul的生理鹽水，其余4組右側(cè)Meynert核各注射1ulAβ25-35的。手術(shù)后第二天，低劑量開(kāi)心散治療組和高劑量開(kāi)心散治療組分別予的開(kāi)心散0.1g/kg，0.3g/kg灌胃，每天一次。Aβ組予等體積的蒸餾水灌胃。腦復(fù)康組予腦復(fù)康0.32g/kg連續(xù)灌胃28天。然后用Morris水迷宮法訓(xùn)練5天，記錄成績(jī)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將大鼠麻醉，斷頭取腦。一側(cè)做免疫組化測(cè)β-APP,

6、Bax，Bcl-2蛋白的表達(dá)，另一側(cè)取腦測(cè)膽堿酯酶活性，余下的組織提取RNA，通過(guò)RT-PCR方法，檢測(cè)Bax,Bcl-2，Trb3mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： 1.開(kāi)心散對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響： Morris水迷宮成績(jī)測(cè)試，隨著訓(xùn)練的進(jìn)行，各組大鼠逃避潛伏期逐減縮短。記錄第五天成績(jī),Aβ組與假手術(shù)組相比，逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)，p＜0.01，給予開(kāi)心散及腦復(fù)康治療后，各治療組與Aβ組相比，逃避潛伏期明顯縮短，p＜0.

7、05。 2.乙酰膽堿酯酶活性測(cè)試： Aβ組與假手術(shù)組相比，活性顯著升高，p＜0.01，給予開(kāi)心散及腦復(fù)康治療后，各治療組與Aβ組相比乙酰膽堿酯酶活性顯著降低，P均＜0.05.大劑量開(kāi)心散組與小劑量開(kāi)心散組之間無(wú)顯著差異， 3.免疫組化法檢測(cè)鼠腦海馬區(qū)APP及bax，bcl-2蛋白的表達(dá)： 結(jié)果顯示注射Aβ25-35后，Aβ組鼠腦額葉皮層和海馬區(qū)APP表達(dá)明顯升高，與假手術(shù)組相比p＜0.01。Bax的表達(dá)也

8、明顯升高，與假手術(shù)組相比P＜0.01。開(kāi)心散大劑量組，開(kāi)心散小劑量組及腦復(fù)康組腦額葉皮層和海馬區(qū)APP的表達(dá)明顯降低，分別與Aβ組相比，p＜0.05。而且Aβ組與假手術(shù)組相比，Bax表達(dá)上調(diào),P＜0.01，bcl-2表達(dá)下調(diào)P＜0.01。開(kāi)心散大劑量組，開(kāi)心散小劑量組及腦復(fù)康組分別與Aβ組相比，腦額葉皮層和海馬區(qū)bax的表達(dá)明顯降低，p＜0.05，而bcl-2的表達(dá)上調(diào)，P＜0.05。 4.RT-PCR測(cè)Bax，Bcl-2mRN

9、A的表達(dá)： RT-PCR現(xiàn)示注射Aβ25-35后，Aβ組bax表達(dá)明顯升高，與假手術(shù)組比，P＜0.01，開(kāi)心散大劑量組，開(kāi)心散小劑量組及腦復(fù)康組分別與Aβ組相比，bax表達(dá)降低，P＜0.05。各組bcl-2未檢測(cè)到。 5.用PCR測(cè)Trb3的表達(dá)： 結(jié)論： 1用老年斑的主要構(gòu)成成分Aβ25-35定位損傷老化大鼠腦Meynert基底核后，結(jié)果顯示模型大鼠腦膽堿能系統(tǒng)遭到損害，功能受損，從而導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)能力的

10、障礙。另外，免疫組化顯示bax表達(dá)增加，bcl-2表達(dá)減少，使Bax/Bcl-2比值增大,real-timePCR顯示trb3基因表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，提示Aβ25-35等毒性物質(zhì)造成的神經(jīng)元凋亡在以AD為代表的退行性變神經(jīng)疾病的發(fā)生中起重要作用，是出現(xiàn)認(rèn)知障礙等臨床表現(xiàn)的重要原因之一。 2各組大鼠經(jīng)灌胃開(kāi)心散后，乙酰膽堿酯酶活性降低，APP生成減少，RT-PCR及免疫組化均顯示Aβ組的bax明顯升高，服藥組與之相比表達(dá)明顯下