1、在分子生物學領域,腺病毒載體是將外源基因導入動物細胞內經常使用的載體之一。由于其靶細胞種類多,對增殖期及靜止期細胞均有很高的轉導效率,易于分離純化,可容納較大的目的基因片段,理化性質較穩(wěn)定,不整合到宿主基因組中,不會引起插入突變,因而被廣泛用于基因治療、體外基因轉染及基因疫苗制備等實驗及臨床研究中。在現代生物學研究中,主要通過體外免疫法制備單克隆抗體,其較體內免疫法有明顯的優(yōu)勢。單抗導向療法雖在臨床中取得了一定治療效果,但其存在的問題也

2、限制了其臨床應用和療效提高。近年來,關于體外免疫,抗原呈遞、T細胞受體、B細胞活化、細胞因子等方面的研究都取得了一定進展。本論文主要通過研究腺病毒介導的體外免疫方法,采用腺病毒介導樹突狀細胞抗原呈遞,再經多肽刺激后,利用流式絀胞術,通過檢測T淋巴細胞IFN-γ的分泌,進而研究加入HDAC抑制劑對腺病毒載體介導的體外抗原呈遞的影響。
　　 目的:
　　 探討腺病毒介導的體外免疫方法,通過腺病毒介導樹突狀細胞抗原呈遞,利用流

3、式細胞術,通過檢測T淋巴細胞IFN-γ的分泌,研究HDAC抑制劑對腺病毒載體介導的體外抗原呈遞的影響。
　　 方法：
　　 1.腺病毒介導的樹突狀細胞抗原呈遞通過建立小鼠骨髓源樹突狀細胞體外培養(yǎng)方法,在此基礎上用攜帶綠色熒光蛋白(GFP)報告基因的腺病毒轉導樹突狀細胞(DC),通過熒光倒置顯微鏡觀察熒光表達,并經流式細胞儀檢測GFP平均熒光強度表達以檢測腺病毒轉導效率。穿刺法制備小鼠脾單細胞懸液,腺病毒轉導樹突狀細胞與脾

4、細胞以1:10比例進行混合細胞培養(yǎng)三天后,經多肽(HYLSTQSAL)刺激通過流式細胞儀檢測T淋巴細胞IFN-γ的分泌。
　　 2.HDAC抑制劑作用于腺病毒載體介導的體外抗原呈遞通過加入HDAC抑制劑(TSA)作用于腺病毒載體轉導樹突狀細胞,經熒光倒置顯微鏡觀察熒光強度表達改變,并通過流式細胞儀檢測GFP熒光強度表達的改變。穿刺法制備小鼠脾單細胞懸液,TSA(±)腺病毒轉導樹突狀細胞與脾細胞以1:10比例進行混合細胞培養(yǎng)三天后

5、,經多肽(HYLSTQSAL)刺激通過流式細胞儀檢測TSA(±)兩組細胞T淋巴細胞IFN-γ的分泌的改變。
　　 結果：
　　 1.經多肽(HYLSTQSAL)刺激后流式細胞儀可檢測到T淋巴細胞IFN-γ的分泌。
　　 2.加入HDAC抑制劑(TSA)作用后,樹突狀細胞表達的GFP熒光強度明顯增強,經多肽(HYLSTQSAL)刺激后通過流式細胞儀檢測TSA(±)兩組細胞T淋巴細胞IFN-γ的分泌沒有顯著性差異。<