1、羥基類固醇硫酸基轉移酶SULT2B1b是一種重要的催化類固醇硫酸化反應的酶，高選擇性的催化3β-羥基類固醇。近年研究發(fā)現(xiàn)，氧化固醇代謝與癌癥的發(fā)生有著密切聯(lián)系。目前，SULT2B1與子宮內膜癌、乳腺癌、前列腺癌及食管癌的關系已有個別報道，但SULT2B1b和肝細胞性肝癌的關系尚無相關研究。關于SULT2B1b在肝臟中的生物學功能研究表明，SULT2B1b主要通過調控肝X受體(Liver X receptor, LXR)參與了肝臟的氧化固

2、醇硫酸化、脂質代謝、肝部分切除后的肝再生過程，并可促進肝細胞的增殖。據(jù)此我們推測，SULT2B1b可能與肝癌的發(fā)生密切相關，通過調控SULT2B1b的表達水平可影響肝癌的進程。因此，本研究將從肝癌細胞增殖與上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)的角度，通過體內外實驗，闡明SULT2B1b表達水平的改變與肝癌細胞惡性生物學特征的關系及具體的分子機制。因此，本研究包含兩部分內容:一方面，研

3、究SULT2B1b對肝癌細胞體內外增殖和血管新生的調節(jié)作用;另一方面，利用轉錄因子活性芯片研究SULT2B1b對下游基因的表達調控，并根據(jù)轉錄因子芯片結果，對SULT2B1b與肝細胞肝癌EMT間的關系及表達調控機制做初步探討。
　　第一部分:羥基類固醇硫酸基轉移酶SULT2B1b對肝細胞肝癌體內外增殖和血管新生的調節(jié)作用及機制。Western blot結果表明，SULT2B1b在小鼠肝癌細胞Hepa1-6中的表達較正常小鼠肝組織及

4、小鼠原代肝細胞顯著增高。CCK8增殖實驗結果顯示，腺病毒介導的SULT2B1b過表達顯著促進Hepa1-6細胞的體外增殖，反之，慢病毒介導的SULT2B1b干擾對此有明顯的抑制作用。體內外實驗結果均顯示，干擾SULT2B1b通過上調FAS和p-JNK，下調cyclinB1、BCL2和MYC的基因與蛋白表達水平，引起Hepa1-6細胞G2/M期阻滯，并誘導細胞的凋亡。裸鼠皮下成瘤實驗結果顯示，干擾SULT2B1b可明顯抑制Hepa1-6細

5、胞移植瘤在裸鼠體內的生長。進一步研究表明，SULT2B1b在人肝癌組織中高表達，并且SULT2B1b的表達水平和人肝癌細胞株(Huh-7，Hep3B，SMMC-7721，BEL-7402)的增殖能力密切相關。干擾SULT2B1b可抑制SMMC-7721和BEL-7402細胞的增殖能力，同時降低cyclinB1的表達水平，并抑制BEL-7402細胞瘤在裸鼠體內的生長。此外，在Hepa1-6細胞中，干擾SULT2B1b的腫瘤條件培養(yǎng)基可明顯

6、抑制bEnd.3細胞的體外增殖，抑制SULT2B1b的表達可降低Hepa1-6細胞裸鼠移植瘤組織中的微血管密度。上述研究結果表明，SULT2B1b能促進肝癌細胞的體內外增殖和血管新生。
　　第二部分:羥基類固醇硫酸基轉移酶SULT2B1b在肝細胞肝癌上皮-間質轉化過程中的作用及調控機制。我們利用轉錄因子活性芯片，研究345種轉錄因子在SULT2B1b調控肝癌細胞惡性生物學行為中的作用。結果顯示，在BEL-7402細胞中，干擾SUL

7、T2B1b表達，共有168個點的轉錄因子表達具有差異（2倍增強或減弱被判斷為有意義）。其中32個點的轉錄因子表達上調，136個點的轉錄因子表達下調，包括與腫瘤EMT發(fā)生相關的ZEB1和Snail的轉錄活性也顯著降低。同時我們分別在高表達SULT2B1b的人肝癌細胞株BEL-7402和低表達SULT2B1b的小鼠原代肝細胞中，研究了SULT2B1b與肝細胞肝癌EMT間的關系及其在肝細胞EMT進程中的作用。Western blot結果進一步

8、表明，干擾SULT2B1b通過降低ZEB1的表達，上調ZO-1的蛋白水平，抑制BEL-7402細胞EMT的發(fā)生。此外，在小鼠原代肝細胞中，SULT2B1b過表達通過調控ZEB1和Snail1的表達水平，引起E-cadherin下調、Vimentin上調，促進TGF-β誘導小鼠原代肝細胞EMT的進程。結果提示，SULT2B1b可能通過調控與EMT發(fā)生相關的轉錄因子活性，影響上皮與間質標志分子的表達，進而參與肝細胞肝癌EMT的發(fā)生與進展。<

9、br>　　綜上所述，羥基類固醇硫酸基轉移酶SULT2B1b在肝癌組織中高表達，并且與肝癌細胞的惡性生物學行為密切相關。干擾SULT2B1b的表達顯著抑制肝癌細胞株的增殖，誘導細胞的凋亡，使肝癌細胞促血管新生能力受阻。其機制主要與上調FAS、p-JNK，抑制BCL2、MYC、降低cyclin B1的表達水平及蛋白穩(wěn)定性，引起細胞周期G2/M期阻滯有關。此外，SULT2B1b通過調控與EMT發(fā)生相關等多種轉錄因子的活性，影響上皮與間質標志分