1、目的：建立HBV cccDNA熒光定量PCR檢測(cè)方法，探討總HBVDNA、HBV cccDNA在重型乙型肝炎中的作用及其相互關(guān)系，并進(jìn)一步探索人工肝支持系統(tǒng)對(duì)重型乙型肝炎患者血清中總HBV DNA、HBVcccDNA的影響。 方法：用不同濃度質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品建立熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線，并檢測(cè)該方法的靈敏性及重復(fù)性；HBV DNA陽性的慢性乙型肝炎(輕度)患者血清標(biāo)本提取物經(jīng)Plasmid Safe<'TM>ATP ependent D

2、nase酶切純化后進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，驗(yàn)證該方法的特異性。以50例重型乙型肝炎患者人工肝血漿置換治療前后血清作為檢測(cè)標(biāo)本，用已建立的熒光定量PCR方法對(duì)總HBV DNA、HBV cccDNA含量進(jìn)行定量檢測(cè)。用SAS8.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果：成功建立了HBV cccDNA熒光定量PCR檢測(cè)方法，線性范圍為1×10<'2>～2.77×10<'9>拷貝/ml。經(jīng)特異性酶切消化后慢性乙型肝炎(輕度)患者血清中未檢

3、測(cè)到HBV cccDNA，重型乙型肝炎患者血清中存在HBV cccDNA。在人工肝血漿置換前后總HBV DNA含量(log<,10>值)分別為6.12，5.93(n=50，P<0.05)；HBV cccDNA含量(log<,10>值)分別為5.14，5.04(n=50，P<0.05)。總HBV DNA與HBV cccDNA之間有較好的相關(guān)性(r=0.78，P<0.01)?？侶BV DNA水平與PT(r=0.37，P<0.01)、ALT(

4、r=0.29，P<0.05)、AST(r=0.39，P<0.01)水平呈正相關(guān)；HBV cccDNA水平與PT(r=0.34，P<0.05)、ALT(r=0.34，P<0.05)、AST(r=0.40，P<0.01)水平呈正相關(guān)。 結(jié)論：研究結(jié)果表明，所建立的HBV cccDNA熒光定量PCR方法具有良好的線性范圍，靈敏度、特異性及重復(fù)性均達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。重型乙型肝炎患者血清中存在HBV cccDNA?？侶BV DNA與HBVcc