1、目的：子宮內(nèi)膜異位癥（endometriosis，EMs，簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥）是指具有生長(zhǎng)功能的子宮內(nèi)膜組織，在子宮被覆面以外的地方生長(zhǎng)繁殖而形成的一種良性婦科疾病。內(nèi)異癥是引起育齡期婦女繼發(fā)性不孕和痛經(jīng)的重要原因。育齡婦女發(fā)病率接近10％。其作為育齡期婦女的常見(jiàn)和多發(fā)病，一直是婦科的難治之癥，且至今尚未明確其病因和發(fā)病機(jī)制。目前人們廣泛接受Sampon提出的“經(jīng)血逆流種植學(xué)說(shuō)”無(wú)法解釋80-90％的婦女有經(jīng)血逆流現(xiàn)象，而發(fā)生異位癥的卻只有10

2、-20％。這說(shuō)明內(nèi)異癥的發(fā)生除了經(jīng)血逆流之外，還需要其它附加因素。內(nèi)異癥雖是一種良性疾病，但其生物學(xué)行為與惡性腫瘤相似。有活性的內(nèi)膜腺體和間質(zhì)通過(guò)轉(zhuǎn)移、侵潤(rùn)和粘附擴(kuò)散并種植到子宮腔外，細(xì)胞粘附分子可能在子宮內(nèi)膜異位種植的過(guò)程中起著重要作用。CD44是分布極為廣泛的細(xì)胞表面跨膜糖蛋白，主要參與細(xì)胞-細(xì)胞，細(xì)胞-基質(zhì)之間的特異性粘連過(guò)程。它是已知的與多種惡性腫瘤發(fā)病有關(guān)的粘附分子之一。近年來(lái)的研究也顯示CD44蛋白表達(dá)的改變可能與內(nèi)異癥發(fā)生

3、、發(fā)展相關(guān)?；蚨鄳B(tài)性可能通過(guò)影響基因的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制和修飾等改變基因的表達(dá)，因此存在于個(gè)體之間的基因多態(tài)性（主要為單核苷酸多態(tài)性）可能成為人類對(duì)疾病易感性差異的遺傳學(xué)基礎(chǔ)。本文我們將探討CD44基因上的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)與內(nèi)異癥發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的的關(guān)系。目的在于進(jìn)一步闡明子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法：本研究采用病例-對(duì)照研究方法。(1)DNA提?。撼槿?59例內(nèi)異癥患者和361例健康對(duì)照個(gè)體的靜脈抗凝血各5ml，采用蛋

4、白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取外周血白細(xì)胞DNA。(2)SNP篩選：根據(jù)HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)中所記載的中國(guó)人群CD44基因SNPs分布情況，應(yīng)用Haploview軟件對(duì)該基因的TagSNP進(jìn)行篩選，共篩選出的5個(gè)SNPs位點(diǎn)。(3)基因分型：通過(guò)直接測(cè)序的方法檢測(cè)48例內(nèi)異癥患者（內(nèi)異癥組）和48例對(duì)照婦女（對(duì)照組）CD44基因上5個(gè)多態(tài)位點(diǎn)(rs1071695，rs8193，rs11821102，rs10836347，rs13347)

5、基因型頻率的分布。統(tǒng)計(jì)分析后采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism， PCR-RFLP）的方法對(duì)rs13347C/T多態(tài)進(jìn)行大樣本的基因型檢測(cè)。
　　 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.5軟件包(SPSS Company, Chicago，Illinois，USA)進(jìn)行，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6、病例組與對(duì)照組的年齡差異行t檢驗(yàn)。用Hardy-Weinberg平衡分析來(lái)評(píng)估對(duì)照組基因型頻率分布狀況。比較病例組與對(duì)照組中各位點(diǎn)基因型頻率的分布行卡方檢驗(yàn)。以非條件Logistic回歸法計(jì)算相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)度的比值比(odds ratio，OR)及95％可信區(qū)間(confidence interval, CI)。
　　 結(jié)果：內(nèi)異癥組患者的年齡與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。健康對(duì)照組中5個(gè)SNPs的基因型頻率的分布均

7、符合Hardy-weinberg平衡(P＞0.05)。
　　 1.直接測(cè)序法檢測(cè)5個(gè)多態(tài)位點(diǎn)在內(nèi)異癥組（48例）和對(duì)照組（48例）中基因型和等位基因型頻率的分布：
　　 1.1 rs1071695C/T多態(tài)，C、T等位基因頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為88.5％、11.5％和86.5％、13.5％;C/C、C/T、T/T基因型頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為77.1％、20.8％、2.1％和83.3％、14.6％、2.1％，等位基

8、因及基因型頻率的分布在兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 1.2 rs8193C/T多態(tài)，C、T等位基因頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為61.4％、40.6％和60.4％、39.6％;C/C、C/T、T/T基因型頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為39.6％、43.8％、16.6％和39.6％、41.7％、18.7％，等位基因及基因型頻率的分布在兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 1.3 rs11821102A/G多態(tài)，G、A等位基因頻率在內(nèi)異癥和

9、對(duì)照組分別為86.5％、13.5％和87.5％、22.5％;G/G、G/A、A/A基因型頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為75.0％、22.9％、2.1％和77.1％、20.8％、2.1％，等位基因及基因型頻率的分布在兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 1.4 rs10836347C/T多態(tài)，C、T等位基因頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為89.6％、10.4％和91.7％、8.3％;C/C、C/T、T/T基因型頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為83.3％、

10、16.7％、0％和85.4％、14.6％、0％，等位基因及基因型頻率的分布在兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 1.5 rs13347T/C多態(tài)，T、C等位基因頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為33.3％、66.7％和42.7％、57.3％;T/T、C/T、C/C基因型頻率在內(nèi)異癥和對(duì)照組分別為12.5％、41.7％、45.8％和18.8％、47.9％、33.3％，等位基因及基因型頻率的分布在兩組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.PCR-

11、RFLP的方法檢測(cè)359例內(nèi)異癥患者和361例對(duì)照組rs13347T/C基因型和等位基因型頻率的分布內(nèi)異癥組T、C等位基因頻率分別為33.7％、66.3％與對(duì)照組(37.5％、62.5％)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.129)；內(nèi)異癥組T/T、C/T、C/C基因型頻率分別為12.5％、42.3％、45.1％與對(duì)照組(15.8％、43.5％、40.7％)相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.330)，與T/T基因型相比，攜帶C/T和C/C基因型沒(méi)有增