巴馬香豬CIK細(xì)胞培養(yǎng)體系建立及體外殺傷活性研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、采集巴馬香豬頸靜脈血液,采用Percoll密度梯度離心法分離其外周血淋巴細(xì)胞,通過對(duì)比試驗(yàn),建立了豬細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer)培養(yǎng)體系,采用流式細(xì)胞術(shù)和實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)鑒定了豬CIK細(xì)胞表型,利用得到的豬CIK細(xì)胞開展了細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn),最終建立了一種快速獲得大量具有腫瘤細(xì)胞殺傷活性的豬淋巴細(xì)胞群的方法,利用該方法可以為抗腫瘤免疫及其機(jī)制研究提供足夠量的效應(yīng)細(xì)胞,也可以為病原微生物引起的體外細(xì)

2、胞免疫和免疫逃逸研究提供研究思路。通過本研究的實(shí)施,獲得如下結(jié)果:
  (1)通過對(duì)細(xì)胞因子和培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn),建立了適用于豬CIK細(xì)胞的培養(yǎng)體系,利用該培養(yǎng)體系培養(yǎng)豬外周血淋巴細(xì)胞5d后,可以使體系中淋巴細(xì)胞的總數(shù)增長(zhǎng)近8倍,利用該培養(yǎng)體系可以為體外細(xì)胞免疫試驗(yàn)提供大量的具有NK細(xì)胞表型的免疫細(xì)胞。
  (2)利用流式細(xì)胞術(shù)分析豬CIK細(xì)胞在培養(yǎng)過程中的比例變化結(jié)果表明,培養(yǎng)5d后,淋巴細(xì)胞中具有NK細(xì)胞表型(CD2+/

3、CD8+/CD3-)的細(xì)胞比例較最初分離的淋巴細(xì)胞提高5.59倍;熒光定量PCR結(jié)果也表明,NK細(xì)胞相關(guān)的其它表面標(biāo)志(CD2、CD3、CD8α、SLA與PRF1)的表達(dá)也在培養(yǎng)第5天達(dá)到了頂峰,與流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果一致。
  (3)豬CIK細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,誘導(dǎo)培養(yǎng)第5d的CIK細(xì)胞在效靶比為12∶1時(shí)達(dá)到對(duì)腫瘤細(xì)胞系(YAC-1)最佳的殺傷活性,殺傷率達(dá)到近80%;而最初分離的淋巴細(xì)胞對(duì)YAC-1的殺傷率僅為56.86%。<

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