1、第一部分宮頸癌組織中巨噬細胞的存在及其分布特點
　　目的
　　探討腫瘤相關巨噬細胞(tumor-associatedmacrophages,TAMs)在宮頸癌組織中的存在及其分布特點。
　　方法
　　免疫組化雙染法檢測61例早期宮頸浸潤癌標本,27例CIN標本和29例正常宮頸標本中CD68陽性的巨噬細胞和D2-40陽性的微淋巴管的存在和分布,并對宮頸癌中巨噬細胞的分布與臨床病理特征間進行分析。
　　結果

2、r>　　1.巨噬細胞在宮頸癌癌巢中的數(shù)量明顯多于在正常宮頸組織的數(shù)量(P<0.05)。在癌間質中的數(shù)量明顯多于在正常宮頸組織和CIN組織中的數(shù)量(P均<0.05),而在癌周或癌旁中的數(shù)量和正常宮頸組織相比無明顯差異(P>0.05)。
　　2.微淋巴管在宮頸癌組織中主要位于癌間質和癌周,而在癌巢區(qū)罕見。微淋巴管在癌間質中的分布明顯高于正常宮頸組織和CIN組織(P均<0.05)。
　　3.對巨噬細胞密度(macrophagede

3、nsity,MD)和微淋巴管密度(lymphaticvesseldensity,LVD)的Pearson相關分析發(fā)現(xiàn)癌間質中的TAMs和癌間質中的LVD(P=0.0002),以及癌間質中的TAMs和癌周的LVD存在顯著正相關(P=0.0322)。在癌巢TAMs和癌間質LVD,癌周TAMs和癌周LVD,或癌旁TAMs和癌旁LVD間未發(fā)現(xiàn)明顯相關性(P>0.05)。
　　4.有淋巴轉移的宮頸癌患者癌間質MD水平顯著高于無淋巴轉移的宮頸

4、癌患者的癌間質MD水平(P=0.033)。腫瘤長徑大于等于2cm的宮頸癌患者癌間質MD水平顯著高于腫瘤長徑小于2cm者(P=0.006)。TAMs數(shù)量與病例年齡、FIGO分期、侵犯深度、組織分化、或組織學類型間無明顯相關性(P>0.05)。
　　結論
　　宮頸癌間質中的TAMs明顯增加,且與淋巴管密度和淋巴轉移相關。
　　第二部分宮頸癌微環(huán)境中巨噬細胞的來源
　　目的
　　探討宮頸癌腫瘤間質中增加的TAMs

5、的來源。
　　方法
　　1.用transwell小室實驗觀察宮頸癌細胞Hela、Siha和C33A對經(jīng)佛波酯誘導THP-1單核細胞轉化而成的巨噬細胞的遷移影響,模擬巨噬細胞的募集。
　　2.在宮頸癌組織中利用免疫組化和免疫熒光的方法用Ki67抗體原位檢測宮頸癌組織中的巨噬細胞的增殖活性。
　　結果
　　1.巨噬細胞體外募集實驗結果顯示同空白對照組和正常宮頸上皮細胞CRL2614組相比,宮頸癌細胞系組巨噬細胞

6、的遷移明顯增加(P均<0.001)。
　　2.免疫組化雙染法和免疫熒光法檢測宮頸癌組織中巨噬細胞的Ki67增殖活性的實驗結果一致顯示,CD68陽性著色的細胞與Ki67陽性著色細胞無重疊,表明宮頸癌組織中的巨噬細胞不具有增殖活性。
　　結論
　　宮頸癌細胞可以促使附近的巨噬細胞發(fā)生定向遷移,宮頸癌癌間質中增加的TAMs可能部分來源于對鄰近區(qū)域已存在的巨噬細胞的募集。
　　第三部分TAMs對宮頸癌細胞的侵襲遷移影響<

7、br>　　目的
　　探討TAMs對宮頸癌細胞的侵襲遷移能力影響。
　　方法
　　1.用鋪有Matrigel基質膠的transwell小室實驗觀察TAMs對宮頸癌細胞Hela、Siha和C33A的侵襲能力的影響。
　　2.用transwell小室實驗觀察TAMs對宮頸癌細胞Hela、Siha和C33A的遷移能力影響。
　　結果
　　1.宮頸癌細胞的transwell侵襲實驗結果顯示:在TAMs的影響下,

8、相比空白對照組,Hela組、Siha組和C33A組細胞穿透基質膠和微孔運動到對側的侵襲數(shù)目均明顯增加(P均<0.001)。
　　2.宮頸癌細胞的transwell遷移實驗結果顯示:在TAMs的影響下,相比空白對照組,Hela組、Siha組和C33A組細胞穿透基質膠和微孔運動到對側的遷移數(shù)目均明顯增加(P均<0.001)。
　　結論
　　TAMs可以促進宮頸癌細胞的侵襲遷移能力。
　　第四部分TAMs促宮頸癌淋巴管

9、的形成
　　目的
　　探討TAMs對宮頸癌淋巴管形成的影響和機制。
　　方法
　　1.分別收集正常宮頸上皮細胞、宮頸癌細胞、巨噬細胞和巨噬細胞-宮頸癌細胞共培養(yǎng)的培養(yǎng)上清作為條件培養(yǎng)基,通過人淋巴管內皮細胞HLEC的體外成管實驗,了解不同細胞對淋巴管形成的影響。
　　2.建立―巨噬細胞-宮頸癌細胞‖直接共培養(yǎng)模型,ELISA法檢測共培養(yǎng)上清中IL-1β和IL-8的分泌。
　　3.通過免疫磁珠分離―巨噬

10、細胞-宮頸癌細胞‖直接共培養(yǎng)模型中的細胞,用RT-PCR法檢測巨噬細胞和宮頸癌細胞在共培養(yǎng)前后淋巴管生成相關因子(VEGF-C/-D/-A、IL-1β和IL-8)的變化。
　　4.建立模擬宮頸癌微環(huán)境的―巨噬細胞-宮頸癌細胞-淋巴管內皮細胞‖直接共培養(yǎng)模型和作為對照的―巨噬細胞-正常宮頸上皮細胞-淋巴管內皮細胞‖直接共培養(yǎng)模型,研究宮頸癌微環(huán)境對淋巴管內皮細胞的表面受體VEGFR-3的表達影響。
　　結果
　　1.HL

11、EC的管腔樣結構的形成數(shù)量在普通LEC培養(yǎng)基,CRL2614條件培養(yǎng)基,巨噬細胞條件培養(yǎng)基,Hela條件培養(yǎng)基,Siha條件培養(yǎng)基,C33A條件培養(yǎng)基中無明顯差別(P>0.05)。只有在巨噬細胞-宮頸癌細胞共培養(yǎng)條件培養(yǎng)基中生長的HLEC形成的管腔樣結構才明顯增加(P<0.001)。
　　2.ELISA結果顯示同正常宮頸上皮細胞CRL2614、單獨培養(yǎng)的巨噬細胞、單獨培養(yǎng)的宮頸癌細胞系相比,巨噬細胞-宮頸癌細胞直接共培養(yǎng)模型中分泌

12、的IL-1β和IL-8水平均明顯增加(P均<0.001)。
　　3.RT-PCR實驗結果顯示IL-1β和IL-8在與巨噬細胞共培養(yǎng)之后的宮頸癌細胞系中的mRNA表達均明顯增加(P均<0.05)。與宮頸癌細胞系共培養(yǎng)之后的巨噬細胞中VEGF-C和VEGF-A的mRNA表達明顯增加,VEGF-D的表達在Hela組顯示增加,IL-1β在Hela和Siha組的表達增加(P均<0.05)。
　　4.對比―巨噬細胞-正常宮頸上皮細胞-H