1、目的：4管內(nèi)皮細胞(vascularendothelialcells，VEC)是血管的主要結(jié)構(gòu)之一，VEC損傷導(dǎo)致的早期血栓形成是冠狀動脈旁路移植術(shù)后移植血管狹窄的啟動因素，促進VEC的修復(fù)再生可有效防治移植血管狹窄。本實驗針對大鼠VECPI3Kp110β亞單位編碼基因Pik3cb，利用RNA干擾技術(shù)，構(gòu)建KDR特異性啟動子/增強子真核表達載體，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染大鼠VEC，探討其對大鼠VEC增殖和凋亡的影響，進一步探索移植血管狹窄的防治方

2、法。
　　 方法：根據(jù)Genbank中PI3Kp110β亞單位編碼基因Pik3cbmRNA序列，按照shRNA設(shè)計原則，分別構(gòu)建大鼠VEC特異性KDR真核表達載體KDR-pGenesil-10-Pik3cb-shRNA和非特異性CMV真核表達載體CMV-pGenesil-10-Pik3cb-shRNA。經(jīng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑LipofectaminTM2000轉(zhuǎn)染大鼠VEC，實驗分為5組，A組：正常VEC組；B組：轉(zhuǎn)染特異性質(zhì)粒KDR-

3、pGenesil-10-Pik3cb-shRNA組；C組：轉(zhuǎn)染非特異性質(zhì)粒CMV-pGenesil-10-Pik3cb-shRNA組；D組：轉(zhuǎn)染陰性對照空質(zhì)粒組；E組：陽性對照組(wortmannin)。分別于轉(zhuǎn)染24h、48h和72h，流式細胞法檢測轉(zhuǎn)染效率，實時熒光定量PCR方法檢測各組細胞Pik3cbmRNA的相對表達量，CCK-8法和流式細胞法檢測各組細胞增殖和凋亡水平。
　　 結(jié)果：轉(zhuǎn)染24h、48h和72h，轉(zhuǎn)染效率

4、分別為（35.2±4.6）％，（25.7±1.8）％和(16.7±1.6)％；實時熒光定量PCR方法測得KDR組Pik3cbmRNA相對表達量分別為(54.82±2.77)％，（50.54±3.98）％和（35.47±4.83）％，均明顯低于正常對照組(P＜0.05)；CCK-8法測得KDR組細胞抑制率分別為（21.98±2.25）％，（24.32±3.04）％和（26.38±5.06）％；流式細胞法測得KDR組細胞凋亡率分別為（9.8