1、背景：內(nèi)臟高敏感反應(yīng)是腸易激綜合征（irritable bowel syndrome,IBS）的核心發(fā)病機(jī)制。IBS 女性多發(fā)，提示雌激素參與IBS 內(nèi)臟高敏感發(fā)病機(jī)制。但臨床上，育齡期和絕經(jīng)期婦女的IBS 癥狀對(duì)雌激素水平的反應(yīng)呈矛盾現(xiàn)象（月經(jīng)期雌激素水平下降時(shí)IBS 癥狀易發(fā)或加重；絕經(jīng)期婦女補(bǔ)充雌激素可能誘發(fā)IBS）。這一現(xiàn)象尚無合理的機(jī)制來解釋。綜合迄今的相關(guān)研究進(jìn)展，參與胃腸內(nèi)臟痛反應(yīng)神經(jīng)調(diào)控通路有兩條：①腦和脊髓感覺反應(yīng)通路

2、，②迷走傳入神經(jīng)抑制性調(diào)控通路。雌激素水平對(duì)IBS 癥狀產(chǎn)生不同影響結(jié)果的臨床現(xiàn)象很可能是與雌激素對(duì)兩條神經(jīng)調(diào)控通路的影響不平衡有關(guān)。眾多的研究顯示雌激素對(duì)于脊髓通路的作用是易化效應(yīng)，但參與迷走神經(jīng)通路的機(jī)制尚未見研究。闡明雌激素參與迷走神經(jīng)通路的機(jī)制是解決上述理論問題的關(guān)鍵之一。
　　 目的：初步證實(shí)雌激素激活腸黏膜肥大細(xì)胞脫顆粒產(chǎn)生5-HT，再經(jīng)迷走傳入神經(jīng)5-HT3Rs 神經(jīng)信號(hào)途徑參與抑制性調(diào)控胃腸傷害性刺激的反應(yīng)機(jī)制。

3、為雌激素參與IBS 發(fā)病的機(jī)制研究和腸道干預(yù)策略的開發(fā)提供新思路。
　　 方法：第一部分：腸黏膜雌激素作用對(duì)大鼠胃腸傷害性刺激反應(yīng)的調(diào)控作用研究。采用正常雌性雙側(cè)卵巢切除SD 大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以結(jié)直腸擴(kuò)張（colorectal distension, CRD60 mmHg）引起的大鼠20s內(nèi)腹肌收縮反應(yīng)（visceromotor response, VMR）評(píng)估胃腸內(nèi)臟傷害性刺激引起的反應(yīng)，對(duì)照研究雌激素體循環(huán)給藥（腹腔注射）和

4、腸粘膜給藥（十二指腸灌注）兩條途徑雌激素調(diào)控胃腸內(nèi)臟傷害性刺激反應(yīng)的不同效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別設(shè)空白組和生理鹽水給藥對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組分別給予①腹腔注射雌二醇，②腸腔灌注雌二醇。灌藥后用PowerLab 4/25 多道生理信號(hào)采集處理系統(tǒng)記錄腹肌收縮電位對(duì)CRD的反應(yīng)。
　　 第二部分：腸黏膜雌激素作用調(diào)控胃腸內(nèi)臟傷害性刺激反應(yīng)的神經(jīng)通路研究。對(duì)照研究迷走神經(jīng)手術(shù)切除、藥物阻斷（利多卡因和Capsaicine）對(duì)腸黏膜雌激素的調(diào)控效應(yīng)，

5、分別設(shè)空白組、假手術(shù)及生理鹽水給藥組對(duì)照。實(shí)驗(yàn)組分別給予①迷走神經(jīng)切除，②利多卡因迷走神經(jīng)處理，③Capsaicine 迷走神經(jīng)處理后腸腔灌注雌二醇記錄CRD 后VMR。并以免疫組化方法觀察不同途徑（體循環(huán)和腸黏膜）雌激素給藥對(duì)迷走神經(jīng)下神經(jīng)節(jié)以及NTX 核團(tuán)c-fos 表達(dá)的影響。免疫組化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為腸腔灌注雌二醇組、腹腔注射雌二醇組和腹腔灌注生理鹽水對(duì)照組。
　　 第三部分：雌激素-迷走傳入通路的神經(jīng)遞質(zhì)研究。采用肥大細(xì)胞穩(wěn)

6、定劑、選擇性5-HT3R 阻斷藥等對(duì)照研究腸腔灌注雌激素對(duì)去卵巢大鼠胃腸內(nèi)臟傷害性刺激反應(yīng)的影響。實(shí)驗(yàn)組分別給予①肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑、②選擇性5-HT3R 阻斷藥和③H1 受體阻斷劑后再腸腔灌注雌二醇后記錄CED 后VMR，設(shè)空白組對(duì)照。
　　 結(jié)果：第一部分：①腸腔灌注雌二醇CRD 后VMR（91.90±13.24）與空白組（118.9±6.285）和生理鹽水對(duì)照組（114.7±3.799）相比明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

7、01 對(duì)生理鹽水，P<0.001 對(duì)基線）。
　　 ②腹腔注射雌二醇CRD 后VMR（434.0±16.50）與空白組（111.3±2.923）和生理鹽水對(duì)照組（114.7±3.799）相比明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。
　　 第二部分：①迷走神經(jīng)切除組腸腔灌注雌二醇后CRD 后VMR（135.1±12.920）與空白組（138.6±6.276）和生理鹽水對(duì)照組（138.7±4.466）相比無明顯變化，無

8、統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。假手術(shù)組腸腔灌注雌二醇后CRD 后VMR(94.42±13.240)與空白組（119.70 ±6.285）和生理鹽水對(duì)照組（114.3±3.799）相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.001）。
　　 手術(shù)組和假手術(shù)組腸腔灌注雌二醇CRD 后VMR 相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P<0.001）。②利多卡因處理迷走神經(jīng)腸腔灌注雌二醇后CRD 后VMR（134.6±14.46）與空白組（139.1±7.481）和生理鹽水對(duì)照組(139.7±7

9、.027)相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。③辣椒素Capsaicin 阻斷迷走神經(jīng)后腸腔灌注雌二醇后CRD 后VMR(133.5±15.00)與空白組（138.1±8.079）和生理鹽水對(duì)照組（141.2±6.097）相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組化結(jié)果顯示腸腔雌二醇灌注組孤束核神經(jīng)元細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)c-Fos 明顯高于腸腔灌注生理鹽水對(duì)照組和腹腔注射雌二醇組。
　　 第三部分：①肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑處理后腸腔灌注雌二醇CRD 后VMR（14

10、8.0±8.652）與空白組（151.2±8.885）相比無明顯變化，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。②腸腔灌注5-HT3 受體阻斷劑格拉斯瓊CRD 后VMR 值（134.82±13.68），15min 后再灌注雌二醇CRD 后VMR 值（137.5±18.100）與空白組相比（125.78±6.38）有明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。③腸腔灌注H1 受體阻斷劑3 天后CRD 后VMR（153.1±18.48），再灌注雌二醇CRD 后VMR（