1、家蠶，是一種典型經(jīng)濟昆蟲。家蠶生命周期由蠶卵、幼蟲、蠶蛹、成蟲四個階段組成。家蠶各階段形態(tài)、生理機能完全不同，屬于完全變態(tài)生物。家蠶按化性可分為一化性、二化性、多化性品種?；圆煌?，蠶的大小、體質(zhì)、繭質(zhì)存在差異，對不良環(huán)境的適應(yīng)能力由強到弱依次為多化性、二化性、一化性。據(jù)商務(wù)部辦公廳統(tǒng)計，2013年我國桑蠶種發(fā)放數(shù)量1655萬張，桑蠶繭產(chǎn)量65萬噸，桑蠶絲產(chǎn)量13.4萬噸。家蠶幼蟲主要通過食桑攝取、存儲食物營養(yǎng)，為吐絲結(jié)繭提供蠶絲原材料

2、。除此之外，家蠶幼蟲已用于生物反應(yīng)器、基因工程、醫(yī)藥等方面的研究。其中，感染白僵菌形成的白僵蠶的醫(yī)藥價值早在李時珍的《本草綱目》就有記載：滅諸瘡瘢痕、主治小兒驚癇夜啼、瘰疬、頭風、風蟲齒痛、散風痰結(jié)核等。將家蠶幼蟲感染蟲草孢子獲取具有藥用價值的蠶蟲草也獲得了越來越多的關(guān)注。家蠶幼蟲血淋巴在抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗凋亡組分引起的細胞凋亡、凝集作用、可作昆蟲細胞培養(yǎng)基等方面已有報道。然而，針對不同化性家蠶經(jīng)不同外源物質(zhì)刺激免疫后的血淋巴的生

3、物醫(yī)學功能研究，目前尚無研究?；诖?，本論文以大腸桿菌、腫瘤細胞、生理鹽水等刺激不同化性家蠶，收集免疫血淋巴。分析其理化性質(zhì)并研究它們對細菌、哺乳動物紅細胞凝集、腫瘤細胞增殖、小鼠急性毒理的影響，更深入地挖掘家蠶血淋巴潛在的藥用功效，探究其在生物醫(yī)學上的新用途。
　　課題主要由兩方面組成：免疫家蠶血淋巴的采集及后處理、理化性質(zhì)、凝集作用、抗菌、體外抗腫瘤、體內(nèi)急性毒理性等生物醫(yī)學活性研究。主要內(nèi)容包括：
　?。?）首先通過細

4、菌、腫瘤細胞、生理鹽水注射到一化性、二化性5齡家蠶血腔中，免疫24 h，不做任何處理的作為空白對照。免疫誘導結(jié)束后，大批量收集不同化性家蠶血淋巴，并作離心、熱處理及冷凍干燥等工藝處理。
　　（2）其次對后處理的血淋巴進行理化性質(zhì)包括pH、光譜吸收、質(zhì)量分數(shù)等檢測。pH計測其酸堿度值；紫外分光光度計測定7種血淋巴在190-900 nm的吸收光譜；冷凍干燥后，由前后質(zhì)量差計算它們的質(zhì)量分數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同化性家蠶經(jīng)過不同誘導免疫后，血

5、淋巴均呈弱酸性。約250 nm處均有一個吸收峰，吸光度值最小的是二化性的細菌處理組，僅為1.3左右；其次是一化性的正常組，吸光度值約為1.4；其余5種誘導免疫組較大且統(tǒng)一，吸光度值約為1.6。而在430 nm處，兩種化性的菌免疫組及一化性的細胞免疫組出現(xiàn)一個新的波峰。
　?。?）通過玻片法、96孔板法測定血淋巴與鼠、兔、人、豬等哺乳動物紅細胞的體外凝集反應(yīng)。玻片法測定結(jié)果是7種血淋巴對鼠、兔紅細胞均有凝集作用，96孔板法檢測結(jié)果是

6、除了UCT-SH沒有凝集素活力外，其他6組均具不同程度的凝集素活力。
　?。?）抑菌圈試驗、微量稀釋法及菌生長曲線試驗等分別定性、定量測定家蠶血淋巴對細菌的抑殺效果，測定抑菌圈直徑、最小抑菌濃度及菌的生長曲線變化等指標。抑菌圈試驗結(jié)果表明7種家蠶血淋巴對金黃色葡萄球菌無抑菌作用，只有菌免疫誘導的兩種化性家蠶血淋巴具有抑制大腸桿菌活性，且具有熱穩(wěn)定性。50-100℃范圍內(nèi)UBT-SH的MIC均小于5.96 ng/mL，UBT-SH隨

7、著溫度升高MIC逐漸減小。7種家蠶血淋巴均可降低大腸桿菌E.coli K12D31生長曲線。
　?。?）通過靜態(tài)、動態(tài) MTT及流式細胞凋亡試驗研究家蠶血淋巴對腫瘤細胞增殖的影響，觀察細胞形態(tài)、計算細胞增殖抑制率、凋亡率等分析家蠶血淋巴對腫瘤細胞的體外作用，研究結(jié)果表明，家蠶血淋巴可改變細胞形態(tài)，促使細胞變圓、皺縮，能抑制SW1990和MCF7細胞的生長，各時間及濃度下的UCT-SH均表現(xiàn)腫瘤生長抑制作用。
　?。?）通過瓊

8、脂培養(yǎng)法體外培養(yǎng)MDA-MB-231多細胞腫瘤球體，并繪制腫瘤球體生長曲線。研究7種家蠶血淋巴對MDA-MB-231多細胞腫瘤球體成型后的影響，主要觀察多細胞腫瘤球體形態(tài)及體積的變化趨勢。實驗結(jié)果表明，瓊脂培養(yǎng)法可成功構(gòu)建MDA-MB-231多細胞腫瘤球體。MTS0-8 h緩慢生長、16-20 h快速增大、20-38 h增長平緩且趨于穩(wěn)定，平均體積約為1.0 mm3。7種家蠶血淋巴可影響MT S形態(tài)，腫瘤球體邊緣呈棉絮狀，透亮細胞消失。

9、與對照組相比，7種家蠶血淋巴能減緩MTS增幅，UBT-SH和BNS-SH組的MTS體積增長比率低于1，即這兩組血淋巴可減小腫瘤體積。
　?。?）一化性、二化性家蠶血淋巴在6 h內(nèi)分別按劑量15000 mg/kg、5001 mg/kg灌胃BALB/c小鼠，研究這些血淋巴對BALB/c小鼠的急性毒理作用。觀察小鼠活動狀態(tài)、稱量體重、檢測肝腎功能、血常規(guī)、解剖尸體并觀察各臟器組織等指標。實驗結(jié)果表明，實驗組各指標與陰性對照組比較均無顯著