1、第一部分：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)定向誘導(dǎo)分化與治療肝功能損傷的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Meserlchymal Stem Cells，MSCs)在肝臟特定微環(huán)境下是否向具肝細(xì)胞表型與功能的細(xì)胞橫向分化(transdifferentiation)并探討其治療肝功能損傷的可行性。 方法：20只裸小鼠，隨機(jī)分為四組，每組5只：A組：經(jīng)尾靜脈移植1×10<'6>個(gè)GFP陽性MSCs，術(shù)前一周及術(shù)后每周兩次經(jīng)腹腔注射四

2、氯化碳0.5ml/kg：B組：經(jīng)尾靜脈注入等量生理鹽水，CCL<,4>注射同前；C組：經(jīng)尾靜脈移植1×10<,6>個(gè)GFP陽性MSCs，余未作任何干預(yù)：D組：正常對(duì)照。術(shù)后4周處死全部受試動(dòng)物，血清檢測肝功能，HE、Masson染色行組織學(xué)觀察，雙熒光染色確認(rèn)GFP陽性細(xì)胞并觀察其是否表達(dá)肝細(xì)胞特異性蛋白。 結(jié)果：A、B組受體肝纖維組織增生顯示肝功能損傷模型制作成功。A組鏡下可見GFP陽性細(xì)胞主要分布于匯管區(qū)(portal ar

3、ea)及小葉間隔周圍，部分同時(shí)表達(dá)白蛋白：B、C、D組鏡下均未見綠色熒光細(xì)胞。A組白蛋白水平明顯高于B組(P<0.05)，兩組ALT水平亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 結(jié)論：持續(xù)肝功能損傷可以有效誘導(dǎo)MSCs向肝遷移增殖，部分MSCs在肝細(xì)胞持續(xù)損傷的微環(huán)境下有向肝樣細(xì)胞(hepatocyte-like cells)橫向分化的潛能，MSCs移植可以在一定程度上修復(fù)受損肝功能。 第二部分：應(yīng)用硝普鈉促進(jìn)經(jīng)門靜脈移植骨髓間

4、充質(zhì)干細(xì)胞肝內(nèi)彌散分布與增殖的實(shí)驗(yàn)研究 目的：觀察與血管擴(kuò)張藥硝普鈉(sodium nitroprusside)聯(lián)合注射是否促進(jìn)經(jīng)門靜脈移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchyal stem cells，MSCs)肝內(nèi)彌散分布與增殖，探尋理想的骨髓源性肝干細(xì)胞移植方法和途徑。 方法：彩色多普勒測量經(jīng)腸系膜上靜脈注射硝普鈉(24nmol/100g)前后大鼠門靜脈內(nèi)徑與血流變化。雄性SD大鼠10只，四氯化碳(CCL<,4>)0

5、.5ml/kg經(jīng)背部皮下注射，每周兩次，持續(xù)至處死，注射兩周即四次后接受細(xì)胞移植。分離培養(yǎng)MSCs，流式細(xì)胞儀鑒定，F(xiàn)e<,2>O<,3>-PLL磁性納米粒子標(biāo)記后單獨(dú)(對(duì)照組，n=5)或與硝普鈉(24nmol/100g)混合(實(shí)驗(yàn)組，n=5)經(jīng)門靜脈植入大鼠肝內(nèi)。兩組分別于移植前及移植后3 h、1w、2w、4w各時(shí)間點(diǎn)行MR肝臟成像，測量肝臟信噪比(signal-to-noise ratio，SNR)。最后一次掃描后將受試大鼠全部處死

6、，剪取肝臟各葉行組織學(xué)檢查。 結(jié)果：經(jīng)腸系膜上靜脈注射硝普鈉后10-20分鐘，大鼠門脈內(nèi)徑較注射前明顯擴(kuò)張(2.6±0.4 mm vs.1.6±0.3 mm，t=-4.47，P<0.01)，門脈血流量增大(1.54±0.26cm<'2>/s vs.0.71±0.17cm<'3>/s，t=-6.13，P<0.01)。細(xì)胞爬片普魯氏藍(lán)染色示MSCs的Fe<,2>O<,3>-PLL標(biāo)記率近100％。MR掃描可見：細(xì)胞移植后3 h肝臟T

7、<,2><'*>WI信號(hào)明顯下降，對(duì)照組低信號(hào)區(qū)以肝門周圍為著，信號(hào)改變不均勻；實(shí)驗(yàn)組肝葉信號(hào)呈彌漫性均勻性減低。移植后3 h、1w、2w，實(shí)驗(yàn)組肝臟SNR明顯低于對(duì)照組(3.38±0.99 vs.6.94±1.16，9.43±1.45 vs.13.36±1.32，14.37±1.41 vs.16.88±1.44，t值分別為-5.22，-4.50，-2.78，P值均<0.05)。組織學(xué)檢查證實(shí)：實(shí)驗(yàn)組鏡下平均每高倍視野約見14±4個(gè)普魯