1、樹(shù)莓在我國(guó)北方山區(qū)分布廣泛，具有絕對(duì)的資源優(yōu)勢(shì)，而且栽培面積還在不斷的擴(kuò)大。樹(shù)莓不僅是一種美味水果，而且在化妝品、保健食品加工方面有著廣泛的用途，其根、莖、葉皆能入藥。有研究表明：樹(shù)莓果實(shí)和葉中黃酮化合物具有抗氧化和清除自由基功能。本試驗(yàn)以東北農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝站提供的樹(shù)莓葉為原料，探索樹(shù)莓葉中的黃酮類(lèi)物質(zhì)提取、分離工藝，并對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析研究，為樹(shù)莓進(jìn)一步廣泛開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，以促進(jìn)樹(shù)莓葉的利用價(jià)值。 本試驗(yàn)建立了樹(shù)莓葉中黃酮類(lèi)

2、化合物的雙波長(zhǎng)分光光度法和高效液相色譜法兩種分析檢測(cè)方法。通過(guò)波譜掃描確定雙波長(zhǎng)分光光度法的測(cè)定波長(zhǎng)為506nm、參比波長(zhǎng)為572nm，此法能夠克服底液強(qiáng)吸收帶來(lái)的干擾。高效液相色譜分析法色譜條件為：采用柱(Agilent-l100C<,18>柱)；流動(dòng)相為甲醇：0.4％磷酸(55：45)；流速為1.0mL/min；檢測(cè)器：Agilent-G1314A紫外檢測(cè)器；柱溫：室溫。 本試驗(yàn)以樹(shù)莓葉作為研究對(duì)象，對(duì)其黃酮化合物進(jìn)行了提取

3、工藝研究。采用纖維素酶酶解與乙醇溶液浸提相結(jié)合的方法對(duì)提取各因素進(jìn)行了單因素和正交試驗(yàn)，確定了試驗(yàn)最優(yōu)提取條件為：纖維素酶濃度0.35mg/mL，酶解時(shí)間1.5h，酶解溫度50℃，介質(zhì)pH為4.0；液料比為20mL/g，浸提時(shí)間為2h，浸提溫度75℃，乙醇濃度為65％，總黃酮含量達(dá)3.46％。 在提取物分離工藝中，引入了大孔吸附樹(shù)脂、硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜新技術(shù)。通過(guò)對(duì)樹(shù)脂種類(lèi)的篩選、影響吸附和解吸因

4、素的研究，建立了樹(shù)脂純化樹(shù)莓葉提取物的工藝：選用AB-8大孔吸附樹(shù)脂為吸附劑，分離樹(shù)莓葉黃酮較適宜的吸附條件為：流速2mL/min、濃度1.5834mg/mL、pH為6；較適宜的解吸條件為：洗脫劑為70％乙醇溶液，流速為1.5mL/min。以此工藝?yán)L制的洗脫曲線結(jié)果表明，采用此純化工藝取得較理想效果，洗脫峰集中，對(duì)稱(chēng)性好，無(wú)明顯拖尾現(xiàn)象，洗脫率為45.62％。 樹(shù)脂純化后的浸膏用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層用柱層析硅膠拌勻，真空干燥

5、，干法裝柱，用氯仿：甲醇梯度洗脫(100：0-80：20)，用正丁醇：水：乙酸(4：5：1)作展開(kāi)劑，紙層析檢驗(yàn)洗脫液，合并流份。用高效液相檢測(cè)硅膠純化后水解部分的成分，并測(cè)其含量，檢測(cè)出水解成分主要為甙元槲皮素和山奈酚，計(jì)算出原料中槲皮素和山奈酚的含量分別為186.4μg/g、52.9μg/g。 用Sephadex LH-20凝膠柱色譜對(duì)水解物進(jìn)行分離，用50％～90％甲醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫流速為1mL/min，通過(guò)TLC