1、目的：分析上海仁濟醫(yī)院鮑曼不動桿菌的院內(nèi)感染情況、耐藥特征及流行趨勢；檢測β-內(nèi)酰胺酶、主動外排泵基因在鮑曼不動桿菌中的分布；探討外排泵在鮑曼不動桿菌耐藥中的作用，為耐藥機制的全面闡述、藥物開發(fā)、臨床治療和控制院內(nèi)感染提供依據(jù)。
　　 方法：①收集2009年1月到10月上海仁濟醫(yī)院臨床分離鮑曼不動桿菌共80株，其中亞胺培南耐藥（IRAB）50株，敏感（ISAB）30 株。瓊脂稀釋法檢測上述菌株對臨床常用13 種抗生素的最低抑菌濃

2、度（MIC），脈沖場凝膠電泳（PFGE）分析主要流行型別。②三維試驗檢測AmpC 酶表型，EDTA 紙片協(xié)同試驗檢測金屬酶表型；PCR 方法檢測β-內(nèi)酰胺酶基因（oxa-23、oxa-24、oxa -51、oxa -58、imp、vim、ampC）攜帶情況。③外排泵抑制試驗（PAβN）檢測外排泵表型，PCR 方法檢測主動外排蛋白編碼基因（adeB、adeJ、adeE、abeM）及AdeABC 調(diào)控基因（adeR、adeS）攜帶情況；實時

3、熒光定量PCR 檢測外排泵基因的表達量，并比較亞胺培南耐藥株與敏感株基因表達的差異；通過DNA 重組將耐藥株中的外排泵基因轉(zhuǎn)入敏感菌中觀察對亞胺培南MIC 變化。
　　 結(jié)果：⑴收集的50 株IRAB 對阿米卡星、環(huán)丙沙星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢哌酮、頭孢西丁、復(fù)方磺胺甲噁唑等抗生素耐藥率均較高（MIC50>128 mg/L），30 株ISAB 對頭孢西丁耐藥率最高，MIC50 為256 mg/L，所有菌株對多粘菌素B 均敏感

4、。 PFGE 結(jié)果顯示80 株細(xì)菌可分為7 型，其中A 型67 株（83.8％），為主要克隆株。⑵三維試驗結(jié)果顯示，42 株（84％）IRAB AmpC 酶表型陽性，30 株ISAB中有9 株（30％）陽性，所有檢測細(xì)菌金屬酶表型均陰性；PCR 擴增，IRAB 中分別有36 株（72％）oxa -23、45 株（90％）ampC 陽性，而ISAB 中oxa -23、ampC陽性的分別為4 株（13.3％）和20 株（66.7％），80

5、株細(xì)菌中oxa-51 均為陽性，oxa-24、oxa-58、imp、vim 均陰性。⑶外排泵表型檢測發(fā)現(xiàn)，33 株IRAB（66％）為陽性，ISAB全為陰性；PCR 擴增，IRAB 中分別有47 株（94％）adeB，45 株（90％） adeJ 和40 株（80％） abeM 基因陽性，在ISAB 中分別有13 株（43.3％） adeB，18 株（60％）adeJ 和15 株（50％） abeM 陽性。47 株adeB 陽性的IRA

6、B 中，43 株（86％） 同時檢測到adeRS，另有6 株 （12％） adeB 陽性的菌株同時檢測到adeE 基因。實時熒光定量PCR顯示IRAB 中adeB、adeJ、abeM 基因相對表達量平均值分別是ISAB的4、3、11 倍。統(tǒng)計學(xué)分析顯示，二者存在明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。通過DNA重組，將adeABC-RS 基因?qū)隝SAB 中，重組子對亞胺培南MIC 有了64-256 倍增加。
　　 結(jié)論：上海仁濟醫(yī)院鮑