1、研究目的:
　　 探討CpG-ODN對人肺腺癌A549細(xì)胞的增殖及其抑癌基因Runx相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3(Runx3)表達(dá)的影響,探討TLR9與肺腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,為基于TLR9的腫瘤治療尋找理論依據(jù)。
　　 研究方法:
　　 (1)不同濃度CpG-ODN作用于人肺腺癌A549細(xì)胞系,用MTT法檢測細(xì)胞的增殖能力。
　　 (2)CpG-ODN誘導(dǎo)A549細(xì)胞后,用實時熒光定量PCR(QRT-PCR)和West

2、ern blot方法,分別從mRNA和蛋白水平檢測Runx3的表達(dá)情況。
　　 (3)針對Runx3基因的特定靶位,采用化學(xué)合成法合成Runx3 siRNA,并瞬時轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞,用熒光顯微鏡對Runx3 siRNA轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率測定;用實時熒光定量PCR(QRT-PCR)和Western blot方法,分別檢測Runx3siRNA瞬時轉(zhuǎn)染入A549細(xì)胞后,Runx3在mRNA和蛋白水平的表達(dá)情況。
　　

3、 (4)Runx3 siRNA瞬時轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,用MTT法觀察CpG-ODN對轉(zhuǎn)染前后的細(xì)胞生長作用的影響。
　　 研究結(jié)果:
　　 (1)CpG-ODN能明顯抑制人肺腺癌A549細(xì)胞的增殖。
　　 (2)不同濃度CpG-ODN刺激A549細(xì)胞后,細(xì)胞中Runx3基因在mRNA和蛋白表達(dá)水平均增加。
　　 (3)Runx3 siRNA瞬時轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞后,根據(jù)熒光顯微鏡下觀察到的熒光細(xì)胞比例,判

4、斷siRNA轉(zhuǎn)染效率,約為40%;Real-time PCR結(jié)果顯示,與未轉(zhuǎn)染組相比,Runx3 siRNA轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞24h后,Runx3基因表達(dá)受到明顯抑制;western blot檢測顯示,與未轉(zhuǎn)染組相比,Runx3 siRNA轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞24h后,Runx3蛋白含量明顯下降。
　　 (4)Runx3 siRNA的瞬時轉(zhuǎn)入對CpG-ODN刺激的A549細(xì)胞增殖抑制作用明顯減弱。
　　 結(jié)論:
　　

5、人肺腺癌A549細(xì)胞表達(dá)TLR9基因,TLR9激動劑CpG-ODN作用于人肺腺癌A549細(xì)胞后,能明顯抑制A549細(xì)胞的增殖。不同濃度CpG-ODN刺激A549細(xì)胞后,細(xì)胞中抑癌基因Runx3在mRNA和蛋白表達(dá)水平均增加。本試驗針對Runx3基因的特定靶位,用化學(xué)合成法合成Runx3 siRNA,Runx3 siRNA的瞬時轉(zhuǎn)入對CpG-ODN刺激的A549細(xì)胞增殖抑制作用明顯減弱,TLR9的配體CpG-ODN可抑制A549細(xì)胞的增殖