1、背景與目的衰老是一種由遺傳因素和內(nèi)外環(huán)境多種復雜因素相互作用而引起的生物學過程,是生命周期中按照一定的規(guī)律發(fā)生在整體、器官、組織、細胞的形態(tài)功能的演變過程,表現(xiàn)為一系列隨增齡而顯示的全身性、漸進性、衰退性的變化或紊亂。關于人體衰老,是一個久經(jīng)不衰的熱門話題。
　　長期以來,人們對人體衰老的起因、機制進行了不斷的探索和研究,但迄今為止仍是一個尚未完全解開的謎。探索衰老發(fā)生的機制既是一個古老的問題,又是一個嶄新的科研領域。隨著近年來中

2、醫(yī)藥學科的快速發(fā)展,以及人們崇尚自然養(yǎng)生理念的流行,使用中藥材或藥食兩用食材進行養(yǎng)生延緩衰老擁有很好的研究前景。河南地域廣闊,地理位置特殊,地形復雜,南北氣候交錯,形成南北區(qū)域兼容并存的豐富中藥資源。大棗,金銀花,四大懷藥等產(chǎn)量豐富且質(zhì)優(yōu),對于其功效的研究有助于因地制宜的發(fā)展本地經(jīng)濟。中藥血清藥理學是在整體動物給藥一段時間后,取含藥成分的血清代替中藥粗提物進行體外實驗的一種方法。自從1991年我國國家中醫(yī)藥管理局對此立題以來,這項研究已

3、得到系統(tǒng)的開展。中藥血清藥理學的優(yōu)勢在于:體現(xiàn)了復方在體內(nèi)系列轉(zhuǎn)化效應,克服了藥物本身的理化性質(zhì)對實驗研究的直接干擾。細胞像其他生物體一樣,有一定的壽命。正常人的二倍體成纖維細胞在體外培養(yǎng)條件下,經(jīng)歷有限的分裂次數(shù),進入一種不可逆的增殖停滯狀態(tài),即復制性衰老。這種在體外培養(yǎng)的細胞增殖傳代的能力,反應了細胞在體內(nèi)的衰老狀況。因此,人二倍體成纖維細胞被公認為研究細胞衰老的模型。
　　實驗方法：1.水提物的制備及檢測:對大棗,金銀花,山

4、藥,菊花,地黃進行熱水浸提,取上清液減壓濃縮除脂醇沉,分別得其水提物。對各水提物進行成分檢測分析,對比標準品檢測其含量。采用鄰苯三酚自氧化法對各水提物進行體外抗自由基能力測定。2.含藥血清的制備:日本大耳白兔雌性若干只,分為各藥物組、空白對照組。藥物組以適量水提物水溶液灌胃,空白對照組給予等量無菌動物飲用水。末次給藥后頸動脈取血,分離血清,滅活后無菌超凈臺濾膜過濾,-70℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?.細胞培養(yǎng)及指標檢測:取20和40代齡的人胚肺

5、上皮成纖維細胞株(2BS細胞),分為:空白組、血清對照組、各藥物組,連續(xù)干預培養(yǎng)4代后用于后期實驗。取經(jīng)處理后的各組細胞進行細胞周期及細胞凋亡測定,細胞上清檢測抗氧化指標。4.統(tǒng)計學處理:本研究所獲得數(shù)值型實驗數(shù)據(jù)以SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計分析,所有試驗數(shù)據(jù)均以±s表示。對于正態(tài)分布且方差齊的資料,采用方差分析,多組樣本之間的兩兩比較采用q檢驗。而對于非正態(tài)分布的資料采用秩和檢驗,多組樣本之間兩兩比較采用基于秩次的M檢驗。檢驗水準α

6、=0.05。
　　實驗結果：1.通過對大棗,山藥,地黃,金銀花,菊花五種單方中藥進行熱水浸提,分別得到其水提物,對水提物進行成分檢測分析,在五種水提物中,大棗水提物總糖含量最高(43.20±0.46),菊花水提物總糖含量最低(20.03±0.49)。對水提物總黃酮進行檢測,金銀花水提物總黃酮含量最高(15.63±0.35),地黃水提物總黃酮含量最低(1.97±0.25)。對五種水提物進行體外抗自由基能力測定,結果顯示:水提物清除超

7、氧陰離子自由基能力強弱順序為:大棗>地黃>山藥>金銀花>菊花,且隨著濃度的增加其清除率逐漸上升。2.五種山藥水提物均能促進衰老細胞增殖;增加超氧化物歧化酶SOD的活性,降低脂質(zhì)過氧化物MDA的含量,改善自由基代謝。大棗和山藥水提物的作用最為明顯,菊花水提物的作用最不明顯。
　　結論:1.各藥物的水提物中均含有多糖、黃酮等眾多生物活性物質(zhì),結合以往的研究資料提示,這些物質(zhì)均具有抗氧化抗自由基的功能,且多種有效物質(zhì)的協(xié)同作用效果明顯。