1、目的： (1)構(gòu)建大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎動(dòng)物模型，觀察大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎病理變化過(guò)程各階段的臨床表現(xiàn)和牙周組織形態(tài)學(xué)的改變，為進(jìn)一步研究在牙周炎發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中棚關(guān)致病因子及其功能調(diào)控提供實(shí)驗(yàn)條件。 (2)觀察TRAF6在大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎病理變化過(guò)程各階段的表達(dá)狀況，探討其與牙周炎發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系及意義。 方法： (1)構(gòu)建大鼠實(shí)驗(yàn)性牙：周炎動(dòng)物模型：將40只大鼠隨機(jī)分成4組即：正常對(duì)照組、4\0帶線縫針組、1號(hào)

2、黑色非吸收性外科縫線組、正畸結(jié)扎絲組，每組各10只。正常對(duì)照組不做任何處置。實(shí)驗(yàn)組分別采用4\0帶線縫針、1號(hào)黑色非吸收性外科縫線、正畸結(jié)扎絲結(jié)扎大鼠雙側(cè)上頜第一磨牙牙頸部，分別于結(jié)扎后2w、4w、6w處死各組大鼠3只，截取包括實(shí)驗(yàn)牙齒及牙周組織的上頜骨，制作HE染色的組織學(xué)標(biāo)本。觀察不同時(shí)期大鼠牙周組織的改變及組織病理學(xué)特點(diǎn)。 (2)在大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎動(dòng)模型基礎(chǔ)上采用免疫組化的方法觀察TRAF6在大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎不同病變階段的

3、表達(dá)特點(diǎn)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： (1)結(jié)扎絲法構(gòu)建大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎動(dòng)物模型，其結(jié)果顯示：結(jié)扎2w組大鼠實(shí)驗(yàn)牙牙齦略顯紅色，探診輕度出血：組織學(xué)觀察：實(shí)驗(yàn)牙牙齦上皮及其下方結(jié)締組織內(nèi)有大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，牙周膜排列整齊，牙槽骨結(jié)構(gòu)完整，符合牙齦炎表現(xiàn)。結(jié)扎4w組見實(shí)驗(yàn)牙牙面有少量牙結(jié)石附著，牙齦紅腫，探診出血，可探及1.0mm的淺牙周袋；組織學(xué)觀察：齦溝壁處有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，齦溝內(nèi)上皮下結(jié)締組織出現(xiàn)膠原纖維變性，結(jié)

4、合上皮向根方增殖，牙槽嵴高度降低，符合早期牙周炎的表現(xiàn)。結(jié)扎6w組實(shí)驗(yàn)牙相應(yīng)頰黏膜紅腫，牙齦探診出血明顯，可探及1.2mm的牙周袋形成，牙槽骨明顯吸收、牙根暴露；組織學(xué)觀察：大鼠牙齦糜爛、壞死，結(jié)合上皮向根方增殖、延伸，形成深牙周袋，其周圍有密集的炎癥細(xì)胞，牙槽骨吸收、破壞，形成明顯的破骨細(xì)胞和骨吸收陷窩，符合晚期牙周炎表現(xiàn)。對(duì)照組臨床觀察：大鼠牙齦呈粉紅色，質(zhì)地堅(jiān)韌，探診不出血，組織學(xué)觀察：大鼠牙周膜排列整齊、牙槽骨表面光滑，朱見破骨

5、細(xì)胞和骨陷窩形成。上述結(jié)果表明構(gòu)建大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎動(dòng)物模型成功，可以為下一步實(shí)驗(yàn)提供基礎(chǔ)。 (2)TRAF6的表達(dá)：免疫組化結(jié)果顯示，在正常對(duì)照組牙周組織中TRAF6在牙齦、牙周膜呈陰性表達(dá)，在牙槽骨中呈弱陽(yáng)性表達(dá)；2w組，TRAF6在牙齦組織呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，牙周膜呈陰性表達(dá)，在牙槽骨中呈弱陽(yáng)性表達(dá)；4w組，TRAF6在牙齦、牙槽骨出現(xiàn)陽(yáng)性的表達(dá)，在牙周膜組織中出現(xiàn)強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；6w組，在整個(gè)牙周組織中TRAF6呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，在牙槽

6、骨的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)存在于骨吸收破壞較嚴(yán)重的牙槽骨邊緣，而在牙槽骨的成骨細(xì)胞中不表達(dá)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行的積分光密度分析結(jié)果顯示：TRAF6在大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎組織中隨病情加重表達(dá)明顯增高。2w組、4w組、6w組和正常對(duì)照組相比陽(yáng)性面積分別增加了1.06、1.62和2.78倍；4w組和2w組相比陽(yáng)性面積增加了0.27倍，6w組和2w組相比陽(yáng)性面積增加了0.58倍，6w組和4w組相比陽(yáng)性面積增加了0.25倍。術(shù)后各實(shí)驗(yàn)組間相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

7、0.05)。 結(jié)論： (1)采用結(jié)扎絲法可成功構(gòu)建大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎的動(dòng)物模型，能模擬牙周炎的自然發(fā)病過(guò)程，較為系統(tǒng)的觀察大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎病程進(jìn)展的狀況，為進(jìn)一步研究牙周病發(fā)生發(fā)展中的相關(guān)致病因子的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 (2)隨著大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎病情的進(jìn)展，TRAF6在病變牙周組織的表達(dá)呈遞增趨勢(shì)，說(shuō)明TRAF6與牙周炎的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，并在其中發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用。其結(jié)果為進(jìn)一步探討TRAF6在牙周炎炎癥細(xì)胞中