1、多殺性巴氏桿菌(Pasteurella multocida,Pm)在世界各地分布非常廣泛，在畜禽中帶菌率較高，有資料指出，豬的鼻道深處和喉頭內(nèi)，帶菌率為30.9％。產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌(Toxigenic Pasturella multocida T Pm)能導(dǎo)致進行性萎縮性鼻炎。進行性萎縮性鼻炎被列為規(guī)?；B(yǎng)豬五大傳染病之一，并被國際獸疫局(Office International Des Epizooties，OIE)定為B類動物傳

2、染病。我國因引種而帶進本病，現(xiàn)已在我國許多省、市(區(qū))有不同程度的發(fā)生和流行。 隨著集約化程度的不斷提高，該病對養(yǎng)豬業(yè)的危害也曰趨嚴重，我國豬傳染性萎縮性鼻炎的發(fā)病率高達60％以上，已造成嚴重的經(jīng)濟損失。T<'+>Pm是進行性萎縮性鼻炎(Progressive atrophic rhinitis，PAR)的主要病原菌，檢測、分離T<'+>Pm是診斷和控制該病的關(guān)鍵?；诋a(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌毒素(Pasteurella multoc

3、idatoxin，PMT)的特性，已經(jīng)建立了一些實驗方法，如豚鼠皮膚壞死實驗、小鼠致死實驗、細胞促生長實驗、胎牛肺細胞毒性實驗、ELISA等，來檢測T<'+>Pm。但這些方法，無論是動物實驗還是細胞培養(yǎng)都必須首先分離出T<'+>Pm?？梢姴僮鞣爆?、費時、費力，臨床上應(yīng)用有很大的局限性，而PCR診斷方法具有特異、快速、敏感等優(yōu)點，可以不進行T<'+>Pm的分離即可對產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌病進行診斷，簡單、快捷、準確。 本試驗根據(jù)Gen

4、Bank上報道的產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌toxA的基因序列，選擇其保守序列作為擴增區(qū)域。利用Oligo 6.0和Primet Premier 5.0軟件設(shè)計篩選出適合的一對PCR引物，擴增片段為338bp，并成功的連接到pGEM-T Easy載體上，構(gòu)建了含有產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌特異基因片斷的重組質(zhì)粒，經(jīng)限制性內(nèi)切酶Not Ⅰ酶切分析、PCR鑒定以及序列分析，驗證所克隆的基因為產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌特異性基因，建立了產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌病的PCR診斷

5、方法。測得的標準產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌特異基因序列與本地分離的產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌特異基因序列同源性為97.94％，特異性和敏感性試驗結(jié)果表明，該診斷序列不能擴增出金黃色葡萄球菌、鏈球菌、沙門氏桿菌、大腸桿菌、敗血性波氏桿菌的DNA；當(dāng)樣本中產(chǎn)毒多殺性巴氏桿菌DNA含量為432.6fg/μl時，仍可擴增出清晰可辨的條帶。利用PCR技術(shù)對55頭份來自延邊地區(qū)的鼻拭子樣本進行檢查，檢出率為16.36％，所建立的PCR診斷方法具有特異、快速、敏感等