1、本論文研究內(nèi)容是水牛垂體催乳素cDNA的克隆與原核表達。論文第一部分包括第一章，為文獻綜述部分；第二部分包括第二章和第三章，為試驗部分。 水牛是我國南方重要的經(jīng)濟動物物種，有乳質(zhì)好和耐粗飼等優(yōu)點，不足的是其繁殖力和泌乳能力遠遠低于奶牛。催乳素是一種由垂體前葉分泌的多肽類激素，對催乳素的研究表明，它可以提高繁殖力和促進泌乳。本試驗的目的，就是通過催乳素基因cDNA的克隆與原核表達，對催乳素基因的結(jié)構(gòu)和功能進行初步探索和揭示，為提高

2、水牛的繁殖力和泌乳能力打下理論基礎(chǔ)。 論文第二章的研究內(nèi)容是水牛垂體催乳素基因的cDNA克隆和序列分析。根據(jù)幾種哺乳動物催乳素基因cDNA序列保守區(qū)，設(shè)計一對特異性引物，從水牛腦垂體中提取總RNA，利用RT-PCR技術(shù)擴增水牛催乳素基因cDNA序列，并重組到pMD18-T載體，對PCR和雙酶切鑒定為陽性的克隆進行測序，序列測定結(jié)果表明：該cDNA序列開放閱讀框(ORF)，長度為690bp，推測編碼氨基酸為229個，其中前19個氨

3、基酸為信號肽。用NCBI上的BLAST功能將測序結(jié)果同GenBank上已發(fā)表的哺乳動物PRL序列進行比對，呈現(xiàn)高度的進化保守性，與牛屬動物同源性高達98.4％，證明所克隆的序列為水牛催乳素基因的cDNA序列。該基因序列已提交到GenBank(登錄號：EF054878)。本試驗首次成功擴增了水牛催乳素cDNA序列，該序列涵蓋了水牛催乳素cDNA的全部ORF區(qū)，為進一步研究水牛的催乳素基因原核表達奠定了基礎(chǔ)。 論文的第三章研究內(nèi)容是

4、水牛催乳素基因的原核表達，在得到的水牛催乳素基因cDNA序列的基礎(chǔ)上，重新設(shè)計帶有酶切位點的引物，擴增去除信號肽序列的催乳素基因目的片段，然后將該目的片段與高效表達載體pOE-30同時進行BamH Ⅰ和HindⅢ雙酶切，酶切產(chǎn)物用T4連接酶連接，連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細胞，成功構(gòu)建了體外表達催乳素蛋白的原核表達載體pQE-30-PRL。經(jīng)PCR和雙酶切鑒定其連接方向的正確性，將鑒定為陽性的重組表達載體pQE-30-PRL轉(zhuǎn)化