1、喜樹(shù)堿(CPT)和10-羥基喜樹(shù)堿(HCPT)是喜樹(shù)中含有的天然抗腫瘤活性成分。由于HCPT的抗腫瘤效果比CPT。好，且毒性較低，因此越來(lái)越受到人們的重視，成為繼紫杉醇后國(guó)際市場(chǎng)上的又一新的抗癌藥物，并成為喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物研究的重要中間體。HCPT在喜樹(shù)種子內(nèi)的天然含量?jī)H為十萬(wàn)分之一左右，尋找有效的方法對(duì)CPT進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和改造，從而獲得活性更強(qiáng)的HCPT成為了研究熱點(diǎn)。 目前，微生物轉(zhuǎn)化己成為天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)修飾和改造的有利工具，它

2、是利用生物代謝過(guò)程中產(chǎn)生的酶對(duì)外源性物質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和改造的化學(xué)反應(yīng)。與化學(xué)方法相比，它具有選擇性高、條件溫和、無(wú)污染、成本低和副產(chǎn)物少等優(yōu)點(diǎn)，可以完成一些用化學(xué)方法難以進(jìn)行的反應(yīng)。 本文選用多種微生物對(duì)CPT的微生物轉(zhuǎn)化進(jìn)行研究，采用薄層層析(TLC)法和高效液相色譜(HPLC)法對(duì)轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行分析，篩選具有CPT微生物轉(zhuǎn)化能力的優(yōu)良菌株，并對(duì)優(yōu)良菌株的微生物轉(zhuǎn)化工藝條件進(jìn)行了研究，主要研究結(jié)果如下： (1)從14種微

3、生物中篩選得到三種對(duì)CPT具有生物轉(zhuǎn)化能力的菌株，分別為毛霉、禾谷鐮刀菌和假單胞菌(B1x)；其中毛霉和假單胞菌(B1x)轉(zhuǎn)化效果較好，在未優(yōu)化條件下，轉(zhuǎn)化率分別為10.6％和17.7％。 (2)優(yōu)化得到毛霉轉(zhuǎn)化CPT的工藝，最佳培養(yǎng)基的組成為葡萄糖2.5％、玉米漿2.5％、酵母膏0.3％；轉(zhuǎn)化條件為接種量5％(菌懸液濃度為5×10<'8>)、轉(zhuǎn)化時(shí)間96h、培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化溫度30℃，轉(zhuǎn)化初始pH值6.0、裝液量40mL、搖床轉(zhuǎn)速1

4、40rpm和底物轉(zhuǎn)化濃度0.15g/L，在加入底物轉(zhuǎn)化前30h時(shí)進(jìn)行誘導(dǎo)有利于轉(zhuǎn)化率的提高，優(yōu)化后CPT的轉(zhuǎn)化率為14.3％。 (3)優(yōu)化得到假單胞菌B1x轉(zhuǎn)化的工藝，最佳培養(yǎng)基組成為牛肉膏0.7％、蛋白胨1.0％和NaCl 0.5％；轉(zhuǎn)化條件為轉(zhuǎn)化時(shí)間60h、轉(zhuǎn)化溫度28℃，轉(zhuǎn)化初始pH6.5、裝液量50mL、搖床轉(zhuǎn)速160rpm和底物轉(zhuǎn)化濃度0.1g/L，轉(zhuǎn)化前16h時(shí)進(jìn)行誘導(dǎo)有利于轉(zhuǎn)化率的提高，優(yōu)化后CPT的轉(zhuǎn)化率為19.