1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ單獨作用對MG-63細胞增殖及凋亡的調(diào)節(jié)作用
　　 背景與目的：腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導配體（TRAIL）能夠誘導多種腫瘤細胞發(fā)生凋亡,但并不是所有的腫瘤細胞都對其敏感。以往研究表明一些化療藥物能夠增強TRAIL所誘導的腫瘤細胞凋亡。本部分實驗旨在研究TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ分別作用于人骨肉瘤MG-63細胞時，對其增殖的抑制作用及誘導凋亡

2、作用。
　　 方法：采用MTT法檢測TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ在不同濃度及不同時間下，分別作用于人骨肉瘤MG-63細胞時，對其增殖的抑制作用。用流式細胞儀檢測TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ分別作用于人骨肉瘤MG-63細胞時，誘導其凋亡的作用。DNA凝膠電泳檢測TRAIL作用于人骨肉瘤MG-63細胞后人骨肉瘤MG-63細胞的凋亡率。
　　 結(jié)果：⑴不同濃度TRAIL對MG-63細胞均具有殺傷作用。當TRAI

3、L濃度較低（小于1000ng/ml）時，殺傷作用的增加不明顯，相同時間不同濃度組比較，差異無顯著性（P>0.05）；而當其濃度增高時，相同時間不同濃度組比較，差異有顯著性（P＜0.05)。⑵阿霉素可殺傷MG-63細胞，藥物對細胞的殺傷率隨著藥物濃度的增高而增加，相同時間不同濃度組間比較差異具有顯著性（P＜0.05)。⑶順鉑可殺傷人骨肉瘤MG-63細胞，藥物對細胞的殺傷率隨著藥物濃度的增高而增加，相同時間不同濃度組間比較差異具有顯著性（P

4、＜0.05)。⑷IFN-γ可殺傷骨肉瘤細胞，這種殺傷作用在24小時內(nèi)較弱，24小時后顯著增大（P＜0.05)。
　　 結(jié)論：⑴TRAIL濃度在高于1000ng/ml時，對人骨肉瘤MG-63細胞的殺傷效果增加明顯。⑵阿霉素濃度在高于4.3μl/ml時，對人骨肉瘤MG-63細胞的殺傷效果增加明顯。⑶順鉑濃度在高于1μmol/ml時，對人骨肉瘤MG-63細胞的殺傷效果增加明顯。⑷IFN-γ殺傷作用在24小時內(nèi)對人骨肉瘤MG-63較弱，

5、24小時后顯著增大。
　　 第二部分：TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ聯(lián)合作用對MG-63細胞增殖及凋亡的調(diào)節(jié)作用
　　 背景與目的：化療是治療骨肉瘤的一種常用手段，但化療藥物對機體的毒副作用大，因而限制了其臨床上的應(yīng)用。因此，如何調(diào)整化療藥物劑量、減少其副作用是當前非手術(shù)治療骨肉瘤的重點。本實驗旨在研究TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ聯(lián)合對人骨肉瘤MG-63細胞凋亡的作用。
　　 方法：采用MTT法檢測

6、當由TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ組成的不同組合，分別作用于人骨肉瘤MG-63細胞時，對其增殖的抑制作用。用流式細胞儀檢測由TRAIL、阿霉素、順鉑、IFN-γ組成的不同組合，分別作用于人骨肉瘤MG-63細胞時，誘導其凋亡的作用。
　　 結(jié)果：⑴TRAIL聯(lián)合阿霉素及INF-γ組對人骨肉瘤MG-63細胞生長的影響相比其他聯(lián)合應(yīng)用組明顯增加，差異有顯著性（P＜0.05)。⑵TRAIL聯(lián)合順鉑及INF-γ組對人骨肉瘤MG-63

7、細胞生長的影響相比其他聯(lián)合應(yīng)用組增加明顯，差異有顯著性（P0.05)。
　　 結(jié)論：⑴TRAIL聯(lián)合阿霉素及INF-γ組對人骨肉瘤細胞MG-63細胞的殺傷效果增加明顯。⑵TRAIL聯(lián)合順鉑及INF-γ組對人骨肉瘤細胞MG-63細胞的殺傷效果增加明顯。
　　 第三部分：TRAIL、阿霉素、IFN-γ聯(lián)合作用于人骨肉瘤MG-63時TRAIL相關(guān)受體表達研究
　　 背景與目的：目前認為細胞表面死亡受體的表達狀況,可以從

8、一定程度上反映靶細胞對TRAIL誘導凋亡的敏感度。如何通過上調(diào)死亡受體的表達水平而增強腫瘤細胞對TRAIL的敏感性,使TRAIL選擇性殺傷癌細胞成為近年來的研究熱點本實驗旨在研究TRAIL、阿霉素、IFN-γ聯(lián)合作用于骨肉瘤MG-63細胞引起凋亡作用的機制。
　　 方法：采用免疫組化法檢測收集的病人骨肉瘤石蠟切片中DR5及YY1基因表達情況。
　　 用RT-PCR法檢測TRAIL、阿霉素、IFN-γ組成的不同組合，分別作

9、用于人骨肉瘤MG-63細胞后人骨肉瘤MG-63中DR5及YY1的表達情況。用western blot法檢測TRAIL、阿霉素、IFN-γ組成的不同組合，分別作用骨肉瘤MG-63細胞后，人骨肉瘤MG-63細胞中DR5及YY1的表達情況。
　　 結(jié)果：⑴收集的病人骨肉瘤細胞中DR5與YY1基因表達情況未發(fā)現(xiàn)有顯著相關(guān)性（P>0.05）。⑵TRAIL聯(lián)合阿霉素及INF-γ對人骨肉瘤MG-63細胞中DR5及YY1的表達有較明顯影響，差異