RNA干擾技術(shù)抑制嗜肝DNA病毒表達(dá)和復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:1.建立嗜肝DNA病毒急性感染小鼠模型,研究嗜肝DNA病毒在小鼠體內(nèi)表達(dá)和復(fù)制狀態(tài)以及小鼠針對嗜肝DNA病毒的免疫應(yīng)答情況.2.研究RNA干擾技術(shù)對嗜肝DNA病毒表達(dá)和復(fù)制的干擾作用,探討siRNA的抗病毒機(jī)制.方法1.利用分子克隆技術(shù)分別構(gòu)建HBV S基因和WHV X基因真核表達(dá)質(zhì)粒,以及WHV感染性克隆.同時(shí)構(gòu)建針對WHV X基因的siRNA表達(dá)質(zhì)粒.2.采用高壓水注射方法,通過尾靜脈分別將具有復(fù)制能力的HBV和WHV感染性克

2、隆導(dǎo)入BABL/cJ小鼠體內(nèi),應(yīng)用ELISA、RIA、Southern Blot、Northern Blot,以及免疫組化等方法,檢測小鼠血清和肝組織中嗜肝DNA病毒抗原表達(dá)動態(tài)變化、肝組織中嗜肝DNA病毒轉(zhuǎn)錄和復(fù)制情況,以及小鼠免疫應(yīng)答狀況.3.HBV S基因和WHV X基因真核表達(dá)質(zhì)粒與siRNA表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,Western blot檢測相應(yīng)嗜肝DNA病毒蛋白表達(dá)水平.4.HBV感染性克隆與siRNA表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染He

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