1、草地早熟禾(Poapratensis L)屬冷季型草坪草，是溫帶地區(qū)重要的草種之一。由于它具有色澤美、抗寒能力強、耐蔭、耐修剪等優(yōu)點，在我國北方地區(qū)多被用作建坪草種之一。但草地早熟禾易受多種真菌感染，其病害的發(fā)生和蔓延，輕者可使草坪褪綠、黃化，形成枯死斑塊，影響觀賞和利用價值；重者可使整塊草坪迅速衰敗，難以利用。因此，培育具有廣譜抗病性能的草地早熟禾新品種具有重要的意義。 本研究以草地早熟禾品種超級伊克利(Poapratensi

2、s L.cv.Total eclipse)的成熟種子為外植體材料，在對草地早熟禾轉(zhuǎn)化再生體系進行優(yōu)化的基礎(chǔ)上，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將來源于黑曲霉的葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase，GO)基因?qū)氩莸卦缡旌蹋⒂珊Y選出的卡那霉素抗性愈傷組織分化再生植株。對所得到的卡那霉素抗性植株進行PCR和RT-PCR分析，利用淀粉一碘化鉀反應(yīng)和TiCl<,4>-PAR比色法測定轉(zhuǎn)基因植株體內(nèi)的過氧化氫(Hydrogen peroxide,H<,

3、2>O<,2>)，以此來檢測葡萄糖氧化酶基因的表達。對所得到的轉(zhuǎn)基因草地早熟禾植株人工接種冠銹菌夏孢子進行抗病性鑒定并測定了抗病性相關(guān)指標。結(jié)果如下： 1．附加2，4-D 2.0 mg/L和BAP 0.2 mg/L激素組合的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是誘導(dǎo)超級伊克利成熟胚愈傷組織發(fā)生較為適宜的培養(yǎng)基，愈傷組織誘導(dǎo)頻率達30％～43％。附加2，4-D 1.0 mg/L和BAP 0.5 mg/L的愈傷組織繼代培養(yǎng)基是超級伊克利成熟胚愈傷組織繼代培養(yǎng)

4、適宜的培養(yǎng)基，在愈傷組織分化培養(yǎng)基中附加2.0mg/L BAP或CPPU，經(jīng)繼代培養(yǎng)3代的愈傷組織的綠苗分化率保持在30％左右。 2．PCR檢測結(jié)果表明外源葡萄糖氧化酶基因已整合到草地早熟禾基因組中， RT-PCR分析結(jié)果表明葡萄糖氧化酶基因已經(jīng)在轉(zhuǎn)錄水平得到表達。H<,2>O<,2>的定性和定量檢測結(jié)果證實葡萄糖氧化酶基因在翻譯水平上表達。 3．人工接種冠銹菌夏孢子后，轉(zhuǎn)基因植株對冠銹病具有良好的抗性，其抗病性相關(guān)指標