1、葡萄糖氧化酶(GOD)在食品行業(yè)、畜牧行業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)均有廣泛的應(yīng)用。以往工業(yè)生產(chǎn)GOD多用黑曲霉整菌發(fā)酵法，該法產(chǎn)生大量的菌絲，發(fā)酵液粘性大，容易聚團(tuán)，造成通氣效果不好，不利于后續(xù)的反應(yīng)。再者，發(fā)酵液成分復(fù)雜，不利于GOD的分離純化，且分離純化后的GOD極易失活，造成使用成本高。黑曲霉孢子是GOD的天然儲(chǔ)藏庫(kù)，其在-20℃下貯存3個(gè)月也不會(huì)丟失任何GOD活性，開發(fā)其作為GOD生物催化劑，具有轉(zhuǎn)化培養(yǎng)基成分簡(jiǎn)單，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物易于分離，易于工業(yè)

2、化應(yīng)用等優(yōu)勢(shì)，但是黑曲霉孢子的剛性膜結(jié)構(gòu)充當(dāng)了天然屏障，導(dǎo)致酶與催化底物無(wú)法接觸。因此，本論文擬基于其孢內(nèi)GOD活性，開發(fā)其作為轉(zhuǎn)化葡萄糖產(chǎn)葡萄糖酸的生物催化劑，并對(duì)開發(fā)其應(yīng)用所涉及到的相關(guān)問(wèn)題進(jìn)行初步研究，具體如下:
　　(1)轉(zhuǎn)化葡萄糖產(chǎn)葡萄糖酸的黑曲霉孢子制備方法研究。黑曲霉孢子在未萌發(fā)時(shí)所具有的GOD活性更大，需要對(duì)孢子萌發(fā)進(jìn)行抑制;孢子壁具有天然的保護(hù)作用，不利于GOD與底物接觸，需要將孢子進(jìn)行透性處理。采用滴定法研究了

3、不同制備方法獲得的黑曲霉孢子的GOD活性。結(jié)果表明，用3％ Citral處理凍融2d的孢子和新鮮的孢子，發(fā)現(xiàn)Citral處理凍融2d的孢子酶的活性更高;相同孢子處理?xiàng)l件，振蕩培養(yǎng)相同的時(shí)間后，109 spores/mL普遍比108spores/mL所獲得酶的活性更高。
　　(2)壓電傳感法測(cè)定GOD活性?；趬弘妭鞲衅鲗?duì)GOD專一催化β-D-葡萄糖底物產(chǎn)生葡萄糖酸這一變化過(guò)程有靈敏的頻移響應(yīng)，建立了壓電傳感器測(cè)定GOD活性的方法。

4、首先，利用該方法測(cè)定了GOD的米氏常數(shù)，將GOD恒定在23.75U，葡萄糖濃度變化范圍為2 mg/mL到40 mg/mL，結(jié)果發(fā)現(xiàn)葡萄糖質(zhì)量濃度和初始反應(yīng)速度呈線性相關(guān)，得到GOD的米氏常數(shù)Km=6.01 mg/mL，最大初速度Vm=33.28 Hz/min，該值與文獻(xiàn)報(bào)道值接近;利用該法建立GOD濃度與頻移之間的標(biāo)定方程，將β-D-葡萄糖底物質(zhì)量濃度維持不變，加入不同濃度的GOD，獲得一定酶濃度下的頻移響應(yīng)曲線，將6 min頻移變化響

5、應(yīng)曲線的斜率定義為酶的初速度，得到酶濃度與v0之間存在線性關(guān)系為v0=1.027[E]+5.214(R2=0.995，n=6)，通過(guò)測(cè)定v0可知道所測(cè)的酶活性。用壓電傳感法測(cè)得酶濃度下限為4.75U。運(yùn)用樣品加標(biāo)的方法在進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)的同時(shí)來(lái)檢驗(yàn)方法的精密度，計(jì)算得到回收率在94.06％到99.34％之間，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在4.3％以內(nèi)，表明壓電傳感法測(cè)定葡萄糖氧化酶的活性結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
　　(3)壓電傳感法測(cè)定黑曲霉孢子生物催化葡

6、萄糖產(chǎn)葡萄糖酸含量。采用壓電傳感法測(cè)定了不同制備方法下黑曲霉孢子轉(zhuǎn)化葡萄糖產(chǎn)葡萄糖酸的含量，具體獲得了未經(jīng)任何處理的孢子、沖洗5次的孢子、凍融處理2d的孢子、1％Citral處理孢子、2％Citral處理孢子、3％Citral處理孢子、3％Citral處理凍融2d的孢子生物催化葡萄糖產(chǎn)葡萄糖酸的頻移響應(yīng)曲線，并建立了頻移與葡萄糖酸含量的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)3％Citral處理凍融2d的孢子反應(yīng)壓電傳感器的頻移最大，生成的葡萄糖酸最多。同時(shí)采用