1、目的：
　　研究臨床分離的革蘭陰性菌中不同種屬細(xì)菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)藥物的耐藥情況;了解革蘭陰性菌中不同種屬細(xì)菌中碳青霉烯酶耐藥基因分布;同時(shí)探討碳青霉烯酶耐藥基因在不同菌屬中的播散特性，為臨床用藥及控制醫(yī)院感染提供依據(jù)。
　　方法：
　　1、回顧性分析2008～2012年間溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床分離革蘭陰性桿菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)藥物的耐藥情況，了解5年間不同菌屬對(duì)碳青霉烯類(lèi)藥物的耐藥趨勢(shì)。
　　2、碳青霉烯類(lèi)藥物對(duì)碳

2、青霉烯耐藥革蘭陰性菌的MIC值檢測(cè):采用瓊脂稀釋法檢測(cè)碳青霉烯類(lèi)藥物亞胺培南、美羅培南和厄他培南對(duì)碳青霉烯耐藥革蘭陰性菌的最低抑菌濃度值(MICs)，結(jié)果根據(jù)2013年CLSI的標(biāo)準(zhǔn)判讀。
　　3、碳青霉烯酶表型檢測(cè):采用改良的Hodge實(shí)驗(yàn)對(duì)碳青霉烯類(lèi)耐藥的腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)行碳青霉烯酶的表型檢測(cè)。
　　4、碳青霉烯酶基因檢測(cè): PCR檢測(cè)碳青霉烯耐藥的腸桿菌科細(xì)菌和銅綠假單胞菌中的A類(lèi)碳青霉烯酶基因、B類(lèi)金屬酶基因和D類(lèi)bl

3、aOXA-48基因，PCR檢測(cè)碳青霉烯耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中的blaOXA-23，-24,-51,-58、 blaIMP、 blaVIM，、blaGIM、blaSIM-1、 blaSPM、 blaNDM-1基因，對(duì)PCR陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序確認(rèn)，分析革蘭陰性菌中不同菌屬中主要流行的碳青霉烯酶基因。
　　5、碳青霉烯酶基因水平轉(zhuǎn)移研究:采用接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)分析碳青霉烯酶基因陽(yáng)性細(xì)菌中的碳青霉烯耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移特性。
　　6、耐碳青霉烯革

4、蘭陰性菌的流行性研究:脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析耐藥菌株之間的同源性，研究攜帶碳青霉烯酶基因的各菌屬細(xì)菌在院內(nèi)的流行特性;同時(shí)用多位點(diǎn)測(cè)序分型方法(MLST)檢測(cè)碳青霉烯酶基因陽(yáng)性的肺炎克雷伯菌的ST型，明確流行的主要ST型，并與國(guó)際流行型進(jìn)行比較。
　　結(jié)果：
　　1、2008～2012年從臨床標(biāo)本中分離的3139株革蘭陰性菌中，對(duì)碳青霉烯酶耐藥的菌株共754株(24.0％)，鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯的耐藥率最高，達(dá)82.3％，其次

5、是銅綠假單胞菌(36.6％)，不同菌屬腸桿菌科細(xì)菌對(duì)碳青霉烯的耐藥性表現(xiàn)不一，本研究腸桿菌科菌中耐藥率最高的是沙雷菌屬(22.1％)，其次是枸櫞酸菌屬(9.0％)，腸桿菌屬(7.7％)，克雷伯菌屬(2.2％)和埃希菌屬(0.4％)，未在變形家族細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)對(duì)碳青霉烯耐藥的菌株。不同菌屬中對(duì)碳青霉烯耐藥細(xì)菌的標(biāo)本來(lái)源都以痰液最多，菌株各臨床科室分布不一，整體無(wú)明顯的病區(qū)集中趨勢(shì)，主要分布于重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)、神經(jīng)外科和燒傷科。
　

6、　2、5年間本院鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯的耐藥率呈逐年上升的趨勢(shì)，且每年的耐藥率都高于全國(guó)CHINET的監(jiān)測(cè)結(jié)果;5年間銅綠假單胞菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)藥物的耐藥率沒(méi)有明顯的上升趨勢(shì)，但耐藥率波動(dòng)較大，且均高于全國(guó)CHINET耐藥性監(jiān)測(cè)結(jié)果，本院腸桿菌科細(xì)菌對(duì)碳青霉烯的耐藥率低于全國(guó)CHINET的監(jiān)測(cè)結(jié)果，且5年間對(duì)碳青霉烯的耐藥率波動(dòng)不大，呈平穩(wěn)狀態(tài)。
　　3、藥敏檢測(cè)結(jié)果顯示不同菌屬細(xì)菌對(duì)不同種類(lèi)的碳青霉烯類(lèi)抗生素的耐藥性呈現(xiàn)不均一性，

7、腸桿菌科細(xì)菌對(duì)厄他培南的耐藥率最高(98.6％)，其次是亞胺培南(62.0％)，對(duì)美羅培南的耐藥率最低(47.3％)，大腸埃希菌和腸桿菌屬細(xì)菌主要對(duì)厄他培南耐藥，肺炎克雷伯菌和沙雷菌屬對(duì)三種藥物全部耐藥，而鮑曼不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌幾乎同時(shí)對(duì)亞胺培南和美羅培南耐藥。
　　4、74株碳青霉烯類(lèi)耐藥的腸桿菌科細(xì)菌中改良Hodge試驗(yàn)陽(yáng)性49株（陽(yáng)性率為62.1％），PCR法檢測(cè)得到碳青霉烯酶基因陽(yáng)性菌株53株，其中43株攜帶blaKP

8、C-2，10株菌攜帶blaIMP，其中1株菌攜帶blaMP-4，9株菌攜帶blaIMP-8;102株耐碳青霉烯的鮑曼不動(dòng)桿菌均攜帶blaOXA-51基因，其中82株菌攜帶blaOXA-23，另外有8株菌攜帶blaIMP。170株碳青霉烯酶耐藥的銅綠假單胞菌中有15株菌(8.8％)攜帶兩種類(lèi)型的碳青霉烯酶基因:其中8株菌攜帶blaIMP-1，7株菌攜帶blaVIM的菌株中，5株攜帶blaVIM-2，2株攜帶blaVIM-4。
　　5

9、、接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)53株碳青霉烯酶基因陽(yáng)性的腸桿菌科細(xì)菌中有16株菌的碳青霉烯酶基因（包括blaKPC和blaIMP）被成功轉(zhuǎn)移到受體菌中，16株接合菌株相應(yīng)的供體菌類(lèi)型廣泛，包括大腸埃希菌，肺炎克雷伯菌，枸櫞酸菌，沙雷菌和腸桿菌，接合菌株與受體菌相比其對(duì)碳青霉烯類(lèi)藥物的MIC值均有不同程度的提高，提示碳青霉烯酶基因可以通過(guò)接合轉(zhuǎn)移的方式在不同種屬細(xì)菌間傳播。而銅綠假單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌中的碳青霉烯酶基因未成功轉(zhuǎn)移到受體菌。
　　

10、6、脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析發(fā)現(xiàn)本院對(duì)碳青霉烯耐藥的鮑曼不動(dòng)桿菌和粘質(zhì)沙雷菌存在廣泛的克隆傳播現(xiàn)象，腸桿菌屬細(xì)菌中也發(fā)現(xiàn)3株具有同源性的細(xì)菌，同時(shí)發(fā)現(xiàn)4株分離自不同年份和不同科室的攜帶KPC的肺炎克雷伯菌具有相同的克隆型，對(duì)產(chǎn)KPC的肺炎克雷伯菌進(jìn)行MLST分型發(fā)現(xiàn)共分為6種ST型，其中4株有相同克隆型的菌株為國(guó)內(nèi)廣泛流行的ST11型，其余株分別為ST880，ST65，ST23，ST730，ST622。銅綠假單胞菌表現(xiàn)為高度異源性，提示醫(yī)院內(nèi)

11、感染的銅綠假單胞菌并非以患者之間的傳播為主，多為患者獨(dú)立感染環(huán)境中的病原體。
　　結(jié)論：
　　1、本研究革蘭陰性菌中鮑曼不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素的耐藥率較高，高于國(guó)內(nèi)外的報(bào)道，腸桿菌科細(xì)菌對(duì)碳青霉烯的耐藥率低于國(guó)內(nèi)報(bào)道。
　　2、不同菌屬細(xì)菌對(duì)不同種類(lèi)的碳青霉烯類(lèi)抗生素的耐藥性存在差異，腸桿菌科細(xì)菌對(duì)厄他培南的耐藥率最高，而鮑曼不動(dòng)桿菌和銅綠假單胞菌幾乎同時(shí)對(duì)碳青霉烯類(lèi)藥物全部耐藥。
　　3、本院

12、碳青霉烯耐藥的腸桿菌科細(xì)菌中分布的碳青霉烯酶基因是blaKPC和blaIMP，且基因的菌株分布廣泛，鮑曼不動(dòng)桿菌中的碳青霉烯酶基因主要是blaOXA-23，與鮑曼不動(dòng)桿菌不同，碳青霉烯酶在銅綠假單胞菌中的分布率較低，其不是銅綠假單胞菌對(duì)碳青霉烯耐藥的主要原因。
　　4、blaKPC和blaIMP可通過(guò)接合轉(zhuǎn)移的方式在腸桿菌科不同菌屬間傳播，提示這些基因存在跨種屬間傳播的危險(xiǎn)性。
　　5、本院耐碳青霉烯的鮑曼不動(dòng)桿菌、粘質(zhì)沙雷