1、研究背景：
　　肺癌與慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease,COPD）是呼吸系統(tǒng)最常見(jiàn)的兩種疾病，兩者關(guān)系極為密切。研究發(fā)現(xiàn)40-70％的肺癌患者伴發(fā)
　　COPD，而COPD患者的肺癌年發(fā)病率高達(dá)16.7/1000人年，遠(yuǎn)超正常人群。我們前期開(kāi)展的meta分析也顯示COPD患者發(fā)生肺癌的危險(xiǎn)度是正常人的2.76倍。COPD可能是肺癌癌前病變的一種中間表型，其在吸煙所致

2、的癌變過(guò)程中存在中介效應(yīng)。因此，對(duì)人群COPD的篩檢有助于肺癌的早期預(yù)防。對(duì)比分析國(guó)內(nèi)外多個(gè)有關(guān)肺癌和COPD的流行病學(xué)研究，我們發(fā)現(xiàn)兩種疾病的環(huán)境病因和遺傳易感位點(diǎn)存在廣泛的重疊，這提示肺癌與COPD可能具有共同的發(fā)病機(jī)制，這些機(jī)制也可能是COPD患者肺癌高發(fā)的病理基礎(chǔ)。
　　肺癌和 COPD的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，基因和環(huán)境因素相互作用，共同影響了兩種疾病的進(jìn)程。吸煙是兩者最主要的病因。我們通過(guò)比對(duì)有關(guān)肺癌、COPD及肺功能的全基

3、因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS），結(jié)果發(fā)現(xiàn)三者的易感基因在人類染色體上有廣泛的重疊，如位于人類染色體15q24區(qū)上的尼古丁受體基因家族（CHRNA3-CHRNB4-CHRNA5）、過(guò)氧化物歧化酶3（Superoxide dismutase3，SOD3）、mutS同源物6（mutS homolog6，MSH6）和鈣粘著蛋白關(guān)聯(lián)蛋白（cadherin-associated protein alpha2，CTNNA2）等。在體內(nèi)，上述基因主要參與胞外

4、信號(hào)識(shí)別和磷酸化信號(hào)傳導(dǎo)、氧化應(yīng)激、DNA損傷修復(fù)和上皮細(xì)胞間質(zhì)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）等過(guò)程。目前，研究已證實(shí)尼古丁受體和 EMT與肺癌和 COPD的發(fā)病，以及 COPD發(fā)展為肺癌的過(guò)程相關(guān)；而磷酸化信號(hào)傳導(dǎo)、氧化應(yīng)激、DNA損傷與修復(fù)等胞內(nèi)活動(dòng)也都參與了肺癌和 COPD的發(fā)病過(guò)程。此外，上述途徑之間還存在相互串話（cross-talk）機(jī)制?；谏鲜鯣WAS的結(jié)果和有關(guān)肺癌與C

5、OPD病理機(jī)制的報(bào)道，我們推測(cè)，肺癌與 COPD可能存在共同的發(fā)病機(jī)制：環(huán)境因素作用于化學(xué)物受體，刺激細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)，直接損傷基因組 DNA和誘發(fā) EMT；同時(shí)環(huán)境因素與受體結(jié)合后產(chǎn)生應(yīng)激信號(hào)，經(jīng)磷酸化信號(hào)通路級(jí)聯(lián)放大和轉(zhuǎn)移至核內(nèi)，激活或抑制相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控氧化應(yīng)激反應(yīng)和EMT進(jìn)程，共同促進(jìn)肺癌和COPD的發(fā)生。
　　目前，對(duì)于肺癌與COPD的關(guān)系認(rèn)識(shí)，多數(shù)是來(lái)源于肺癌的病例-對(duì)照研究或臨床特征描述；對(duì)肺癌和COPD可能具有的

6、共同環(huán)境病因和基因易感位點(diǎn)的認(rèn)識(shí)，也都來(lái)自于各自獨(dú)立的疾病研究；肺癌的關(guān)聯(lián)研究中往往忽視了對(duì)COPD效應(yīng)的分析。因此，本研究通過(guò)在廣州、蘇州兩中心，同時(shí)進(jìn)行肺癌病例與對(duì)照、COPD病例與對(duì)照的平行研究，（1）揭示肺癌與COPD的共同環(huán)境危險(xiǎn)因素，評(píng)價(jià)COPD在這些共同病因致肺癌發(fā)生中的中介效應(yīng)；（2）沿著“受體→信號(hào)傳導(dǎo)途徑→轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子→氧化應(yīng)激、DNA損傷和EMT→肺部疾病”的研究思路，分析了尼古丁受體家族、氧化還原酶WWOX和EM

7、T調(diào)控基因的遺傳變異【包括單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）和拷貝數(shù)變異（copynumber variation，CNV）】與肺癌和COPD發(fā)病及預(yù)后的關(guān)聯(lián)，并探索陽(yáng)性關(guān)聯(lián)位點(diǎn)的生物學(xué)功能，闡述肺癌與COPD的共同遺傳易感分子。以期從基因和環(huán)境以及基因-環(huán)境交互效應(yīng)層面揭示肺癌與COPD的共同發(fā)病機(jī)制，從而為兩病的預(yù)防與控制提供新的思路和科學(xué)依據(jù)。
　　第一部分：肺癌與COPD的共

8、同病因及COPD中介效應(yīng)分析
　　肺癌與COPD的關(guān)系極為密切。既往多個(gè)流行病學(xué)研究顯示兩者環(huán)境病因譜有廣泛的重疊，如吸煙、被動(dòng)吸煙、職業(yè)暴露、肺部疾病史等。然而當(dāng)前對(duì)肺癌和COPD環(huán)境病因的研究都是獨(dú)立開(kāi)展的，地區(qū)、時(shí)間和種族間的異質(zhì)性讓我們很難比較這些病因在肺癌和 COPD的效應(yīng)差異，且目前仍未有研究系統(tǒng)化地闡述兩者的共同病因。另外，近期國(guó)外有研究發(fā)現(xiàn)COPD在吸煙導(dǎo)致的肺癌危險(xiǎn)效應(yīng)中起著中介作用。其他病因亦可能在致肺癌的過(guò)程

9、中起著類似效應(yīng)，但尚未有研究報(bào)道。
　　目的：
　　揭示肺癌與COPD的共同環(huán)境病因譜及評(píng)價(jià)COPD在肺癌發(fā)病中的中介效應(yīng)，分析肺癌和COPD的外在聯(lián)系，為兩病的綜合預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　在廣州和蘇州兩地開(kāi)展肺癌和COPD獨(dú)立的病例-對(duì)照研究。其中，肺癌的研究包括廣州地區(qū)肺癌病例1056例和正常健康對(duì)照1056例，蘇州地區(qū)肺癌503例和對(duì)照623例；COPD的研究包括廣州地區(qū)COPD病例1025例和

10、肺功能正常對(duì)照1061例，蘇州地區(qū)COPD病例486例和對(duì)照616例。對(duì)照皆按與病例性別相同、年齡（±5歲）以頻率配比的方法，從參加健康體檢項(xiàng)目的人群中進(jìn)行隨機(jī)選擇。問(wèn)卷收集個(gè)體特征和環(huán)境暴露等22個(gè)項(xiàng)目信息。采用SAS9.3軟件進(jìn)行多因素logistic回歸模型分析，揭示肺癌和 COPD的共同環(huán)境暴露因素。利用無(wú)順序多變量 Logistic回歸模型和Sobel檢驗(yàn)評(píng)價(jià)COPD在共同因素致肺癌發(fā)病過(guò)程中的中介效應(yīng)。
　　結(jié)果：

11、r>　　肺結(jié)核史、肺氣腫史、吸煙（或吸煙量）、被動(dòng)吸煙、職業(yè)接觸金屬毒物、住房通風(fēng)差、使用生物燃料和少食蔬菜水果8項(xiàng)暴露因素能顯著增加肺癌和COPD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，其危險(xiǎn)效應(yīng)方向一致。進(jìn)一步的無(wú)順序多變量Logistic回歸模型顯示，吸煙和使用生物燃料對(duì)COPD人群發(fā)生肺癌風(fēng)險(xiǎn)的增加效應(yīng)（吸煙：OR=3.13；生物燃料：OR=2.99）顯著高于非COPD人群（吸煙：OR=1.31；生物燃料：OR=1.34）（P值分別為4.53×10-6和8

12、.42×10-5），且COPD在吸煙和生物燃料的致肺癌發(fā)病效應(yīng)中具有顯著的中介作用，分別占據(jù)總效應(yīng)的13.1%和6.1%（Sobel檢驗(yàn)：P值分別為0.005和0.039）。
　　結(jié)論：
　　肺癌與 COPD的環(huán)境病因譜存在廣泛的重疊。COPD在吸煙和生物燃料的致肺癌效應(yīng)中具有中介效應(yīng)，提示吸煙者和生物燃料使用者傾向于先發(fā)生COPD再發(fā)展為肺癌，這為肺癌和COPD的人群預(yù)防提供了新的思路。
　　第二部分：肺癌與COPD

13、的共同遺傳易感性研究
　　第一節(jié)尼古丁受體3（CHRNA3）基因遺傳變異與肺癌和COPD發(fā)病及預(yù)后的關(guān)系
　　人類15號(hào)染色體長(zhǎng)臂24區(qū)（15q24）是已明確的肺癌和COPD的易感基因區(qū)段，位于該區(qū)域內(nèi)的尼古丁受體家族基因簇（CHRNA3-CHRNB4-CHRNA5）上的多個(gè)遺傳變異被報(bào)道與肺癌、COPD、肺功能和吸煙行為存在顯著關(guān)聯(lián)。我國(guó)人群的研究同樣報(bào)道了該區(qū)域還存在一個(gè)功能性的SNP rs6495309，其與肺癌發(fā)病和

14、吸煙行為密切相關(guān)，但我國(guó)人群尚未有研究進(jìn)行上述基因變異與COPD發(fā)病關(guān)聯(lián)的探索。此外，吸煙可影響肺癌及 COPD的預(yù)后，這些 SNPs極有可能通過(guò)介導(dǎo)吸煙行為而影響肺癌或COPD的預(yù)后。因此，我們假設(shè)位于人類15q24區(qū)上的多態(tài)位點(diǎn)可能與我國(guó)人群肺癌和COPD的發(fā)病及預(yù)后相關(guān)。
　　目的：
　　分析人類15q24區(qū)上的SNPs在我國(guó)人群肺癌和COPD發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　利用連鎖不平衡分析（Lin

15、kage disequilibrium，LD）于GWAS報(bào)道的關(guān)聯(lián)SNPs中篩選出CHRNA3基因上兩個(gè)功能性的SNPs（rs6495309T>C和rs1051730G>A），通過(guò)PCR-RFLP的方法檢測(cè)前述人群的兩SNPs的基因型，用多因素logistic回歸模型和Log-Rank檢驗(yàn)以及Cox回歸模型分別評(píng)估兩SNPs與疾病發(fā)病和預(yù)后關(guān)聯(lián)。針對(duì)陽(yáng)性關(guān)聯(lián)位點(diǎn)rs6495309T>C，構(gòu)建螢光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)，分析T等位基因與C等位基

16、因的轉(zhuǎn)錄活性，并通過(guò)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)兩等位基因?qū)煵菽铩⒛峁哦?、煙草亞硝胺（NNK）和苯并芘（BaP）刺激的敏感性差異。
　　結(jié)果：
　　rs6495309T>C與肺癌的關(guān)聯(lián)符合顯性遺傳模型，rs6495309C變異基因型（CC+TT）能顯著增加肺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR=1.57，95%CI=1.31-1.87），縮短肺癌患者的生存期，增加肺癌患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)（HR=1.41，95%CI=1.13-1.75）；其與COPD的關(guān)

17、聯(lián)符合隱形遺傳模型，CC基因型能顯著增加 COPD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR=1.32，95%CI=1.14-1.54），加快肺功能下降，且與 COPD進(jìn)展呈顯著正相關(guān)（P=0.033）。rs6495309T>C變異還與吸煙行為存在顯著的交互效應(yīng)。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，相較T等位基因，攜帶C等位基因的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性更高，煙草凝集物和尼古丁刺激能顯著擴(kuò)大兩等位基因之間的活性差異。而 rs1051730G>A與肺癌和 COPD的發(fā)病及預(yù)后的關(guān)聯(lián)皆沒(méi)有顯著性。

18、
　　結(jié)論：
　　CHRNA3基因SNP rs6495309C變異可顯著增加其基因的轉(zhuǎn)錄活性，提高機(jī)體細(xì)胞對(duì)毒物的敏感性，且與吸煙存在基因-環(huán)境交互效應(yīng)，使得人群攜帶者對(duì)肺癌和COPD更為易感，病患攜帶者的肺癌和COPD預(yù)后更差。
　　第二節(jié)尼古丁受體7（CHRNA7）基因拷貝數(shù)變異與我國(guó)人群肺癌和COPD發(fā)病及預(yù)后的關(guān)聯(lián)研究
　　拷貝數(shù)變異（CNV）是基因組內(nèi)廣泛存在的一種較大片段的遺傳變異，指的是1 kb以上

19、基因組大片段的拷貝數(shù)增加或者減少。相較單個(gè)位點(diǎn)核苷酸（SNP）的變化，CNV更易于引起基因的結(jié)構(gòu)異常和表達(dá)水平的變化，從而影響疾病的發(fā)生與發(fā)展?？梢灶A(yù)見(jiàn)，位于疾病易感基因上的 CNVs極有可能影響人群疾病易感性。由此，我們假設(shè)位于尼古丁受體基因上的 CNVs可影響尼古丁基因功能而與我國(guó)人群肺癌和COPD發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。
　　目的：
　　探索尼古丁受體家族基因拷貝數(shù)變異與肺癌和COPD的發(fā)病及預(yù)后的關(guān)系，闡明其生物學(xué)機(jī)制。

20、r>　　方法：
　　參考基因組變異數(shù)據(jù)庫(kù)（Database of Genomic Variants，DGV），從11個(gè)神經(jīng)性尼古丁受體家族基因（CHRNA2、CHRNA3、CHRNA4、CHRNA5、CHRNA6、CHRNA7、CHRNA9、CHRNA10、CHRNB2、CHRNB3和 CHRNB4）中選取中國(guó)人群拷貝數(shù)變異頻率>5%的拷貝數(shù)變異，分別為CHRNA7基因的CNV-3956和CHRNA10基因的CNV-3833。在前

21、期病例-對(duì)照研究的基礎(chǔ)上，利用中通量Accucopy法進(jìn)行初步檢測(cè)，篩選潛在的陽(yáng)性關(guān)聯(lián)位點(diǎn)，進(jìn)而用Taqman實(shí)時(shí)定量技術(shù)進(jìn)行大樣本的基因型鑒定。進(jìn)一步在肺組織中檢測(cè)CHRNA7基因的表達(dá)水平，分析基因型-表型的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果：
　　CHRNA7基因CNV-3956與肺癌的關(guān)聯(lián)符合隱性遺傳模型，攜帶4-copy基因型個(gè)體的肺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)是攜帶2、3-copy基因型個(gè)體的1.49倍（ OR=1.49，95%CI=1.29-1.

22、73）；且4-copy基因型肺癌患者肺癌生存期顯著短于后者（中位生存期：11月vs.14月；HR=1.25，95%CI=1.07-1.45）；CNV-3956與COPD的關(guān)聯(lián)符合顯性遺傳模型，相較2-copy基因型攜帶者，3/4-copy基因型攜帶者發(fā)生COPD的風(fēng)險(xiǎn)增加了45%（OR=1.45，95%CI=1.26-1.66），第一秒用力呼氣量（pre-Forced expiratory volume in one second，pr

23、e-FEV1）更低（P=1.46×10-5），且 FEV1值下降的更快（-0.113±0.156 vs.-0.078±0.099；t檢驗(yàn)：P=0.034）。此外，CNV-3956與吸煙在增加肺癌和COPD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)上有顯著的交互作用。進(jìn)一步分析CNV-3956拷貝數(shù)與吸煙量關(guān)系發(fā)現(xiàn)其與吸煙包年數(shù)成正相關(guān)（P=4.00×10-4）。
　　在肺癌組織中，CNV-3956拷貝數(shù)與CHRNA7基因mRNA和蛋白質(zhì)水平呈顯著正相關(guān)（mRNA：

24、P=0.049；蛋白質(zhì)：P=0.013）。本研究未發(fā)現(xiàn)CHRNA10基因CNV-3833與肺癌或COPD的發(fā)病或預(yù)后存在顯著關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)論：
　　CHRNA7基因拷貝數(shù)變異CNV-3956可改變其基因表達(dá)，影響吸煙者吸煙量，從而改變肺癌和COPD發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)及預(yù)后，它可能是一個(gè)潛在的生物標(biāo)志物，用于預(yù)測(cè)肺癌和COPD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和預(yù)后評(píng)價(jià)。
　　第三節(jié) EMT調(diào)控子Snai1基因外顯子Val118Ala變異能降低我國(guó)人群

25、肺癌和COPD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)
　　上皮細(xì)胞間質(zhì)性轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）是指上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為間質(zhì)性細(xì)胞。近年來(lái)，大量研究提示EMT可促進(jìn)肺癌和COPD的發(fā)生發(fā)展。GWAS亦報(bào)道了EMT相關(guān)基因的遺傳變異與肺癌和COPD的發(fā)病相關(guān)。在機(jī)體內(nèi)，EMT主要由多個(gè)核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子即EMT調(diào)控子所調(diào)控，這些分子發(fā)揮控制EMT過(guò)程的“開(kāi)關(guān)”效應(yīng)，可以下調(diào)上皮細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)，并上調(diào)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志

26、物的表達(dá)。目前，已有多個(gè)EMT調(diào)控子被報(bào)道。其中，鋅指蛋白家族的Snai1和Slug，E盒結(jié)合鋅指蛋白Zeb1和Zeb2，以及基本螺旋環(huán)螺旋因子Twist1受到廣泛關(guān)注。因此，我們假設(shè)位于 EMT調(diào)控子基因上的潛在功能性多態(tài)可能通過(guò)單獨(dú)或聯(lián)合效應(yīng)影響EMT的過(guò)程，最終導(dǎo)致肺癌或COPD易感。
　　目的：
　　探究與肺癌和COPD發(fā)生發(fā)展相關(guān)的EMT調(diào)控分子的潛在功能性SNPs，并探明其生物學(xué)機(jī)制。
　　方法：
　

27、　參考dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)，針對(duì)Snai1，Slug，Zeb1，Zeb2和Twist1這5個(gè)主要的EMT調(diào)控子，選取位于各編碼基因啟動(dòng)子區(qū)（上游-2000bp）、5’-非翻譯區(qū)、外顯子區(qū)和3’-非翻譯區(qū)的常見(jiàn)（低發(fā)等位基因頻率>5%）潛在功能性多態(tài)位點(diǎn)，共7個(gè)SNPs，以Taqman基因分型技術(shù)檢測(cè)各SNP的基因型。針對(duì)所發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性關(guān)聯(lián)位點(diǎn)，Snai1基因外顯子變異（Val118Ala），構(gòu)建含不同等位基因的pcDNA3.1表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染人

28、肺細(xì)胞系A(chǔ)549和16HBE，鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化，利用劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移和侵襲能力，采用熒光定量PCR和Western blot法檢測(cè)受Snai1轉(zhuǎn)錄調(diào)控的EMT標(biāo)志分子E鈣粘著蛋白（E-cadherin，CDH1）、纖連蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）和波形蛋白（Vimentin，VIM）的表達(dá)，分析攜帶不同118位氨基酸的Snai1蛋白的轉(zhuǎn)錄調(diào)控能力和促EMT效應(yīng)差異。
　　結(jié)果：
　　V

29、al118Ala變異與肺癌和COPD的發(fā)病顯著相關(guān)，相較于118Ala純合基因型攜帶者，118Val雜合基因型和純合基因型攜帶者發(fā)生肺癌的風(fēng)險(xiǎn)下降24%（OR=0.76，95%CI=0.65-0.90），發(fā)生COPD的風(fēng)險(xiǎn)下降了22%（OR=0.78，95%CI=0.65-0.93）；118Val基因型降低肺癌風(fēng)險(xiǎn)的效應(yīng)在COPD人群中更顯著（P=0.001）；Val118Ala還與肺癌吸煙患者的腫瘤分期相關(guān)（P=0.013），118A

30、la變異基因型能顯著降低吸煙患者腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的概率。體外功能實(shí)驗(yàn)表明，過(guò)表達(dá) Snai1-118Ala蛋白的細(xì)胞，其遷移和侵襲能力及間質(zhì)化細(xì)胞特征皆弱于過(guò)表達(dá)Snai1-118Val的細(xì)胞；Snai1-118Ala上調(diào)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物FN和Vim的幅度顯著低于Snai1-118Val，但兩者對(duì)上皮標(biāo)志物E-cad表達(dá)的調(diào)控?zé)o顯著性差異。此外，本研究未發(fā)現(xiàn)其他EMT調(diào)控子的SNPs與肺癌或COPD的發(fā)病及預(yù)后有顯著關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)論：<

31、br>　　EMT調(diào)控子Snai1基因外顯子Val118Ala的遺傳變異能影響該基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控能力，延緩肺上皮細(xì)胞的間質(zhì)型轉(zhuǎn)化，從而降低肺癌和COPD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，其對(duì)肺癌的保護(hù)效應(yīng)在COPD人群中更為顯著。
　　第四節(jié)氧化還原酶WWOX基因拷貝數(shù)變異影響我國(guó)人群肺癌和COPD的易感性
　　氧化應(yīng)激（Oxidative Stress）是指體內(nèi)氧化與抗氧化作用失衡，產(chǎn)生過(guò)氧化物和氧自由基，導(dǎo)致中性粒細(xì)胞炎性浸潤(rùn)，損傷機(jī)體細(xì)胞成分如

32、DNA。氧化應(yīng)激參與肺癌和 COPD的發(fā)生發(fā)展。近期一項(xiàng)在歐洲人群開(kāi)展的 GWAS發(fā)現(xiàn)，位于編碼 WW結(jié)構(gòu)域氧化還原酶（WWOX）基因上的遺傳變異（rs12716852）與肺功能有顯著關(guān)聯(lián)，而我們前期研究也發(fā)現(xiàn)該基因SNPs與我國(guó)人群的肺癌發(fā)病相關(guān)，提示該基因可能是肺癌和 COPD共有的易感基因。WWOX基因位于人類染色體普通脆性位點(diǎn)FRA16D（16q23~16q24.1）內(nèi)，該區(qū)域存在大量的拷貝數(shù)變異（CNVs）。這些拷貝數(shù)變異極有

33、可能影響WWOX的基因結(jié)構(gòu)或表達(dá)，從而與人群肺癌或COPD的易感性相關(guān)。因此，我們假設(shè)位于 WWOX基因上的 CNVs可影響我國(guó)人群的肺癌和COPD易感性。
　　目的：
　　研究氧化還原酶WWOX基因拷貝數(shù)變異與我國(guó)人群肺癌和COPD發(fā)病的關(guān)聯(lián)。
　　方法：
　　利用 Taqman實(shí)時(shí)定量技術(shù)檢測(cè)前述人群 WWOX基因常見(jiàn)的拷貝數(shù)變異CNV-67048，應(yīng)用ACCUCOPY assay和Affymetrix Ge

34、nome-Wide HumanSNP Array6.0芯片驗(yàn)證 Taqman技術(shù)結(jié)果檢測(cè)的準(zhǔn)確性。對(duì) WWOX進(jìn)行轉(zhuǎn)錄子測(cè)序，分析CNV-67048與WWOX外顯子缺失的關(guān)系，并采取real-timePCR、western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肺組織內(nèi)WWOX基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平，分析基因型-表型關(guān)聯(lián)，以揭示該遺傳變異的生物學(xué)功能。
　　結(jié)果：
　　CNV-67048拷貝數(shù)變異與肺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈顯著的劑量-效應(yīng)關(guān)系（Ptr

35、end=1.12×10-10）。與野生2-copy基因型攜帶者比較，缺失基因型（1-拷貝或者0-拷貝）攜帶者發(fā)生肺癌的風(fēng)險(xiǎn)上升了40%（OR=1.40，95%CI=1.20-1.63）。CNV-67048基因型為缺失型的肺癌組織，其發(fā)生 WWOX外顯子6-8缺失的概率也顯著增加（P=0.021），其WWOX基因的表達(dá)水平也顯著低于2-copy基因型組織（P<0.05）。此外，該遺傳變異同樣與 COPD的發(fā)病相關(guān)，缺失基因型（1-拷貝或者

36、0-拷貝）攜帶者發(fā)生 COPD的風(fēng)險(xiǎn)是2-copy野生基因型攜帶者的1.30倍（ OR=1.30，95%CI=1.12-1.50）。
　　結(jié)論：
　　WWOX基因缺失型拷貝數(shù)變異CNV-67048與我國(guó)人群發(fā)生肺癌和COPD的易感性存在顯著關(guān)聯(lián)。其生物學(xué)機(jī)制可能是缺失型CNV-67048可增加WWOX發(fā)生外顯子6-8缺失的概率，導(dǎo)致WWOX表達(dá)低下或不表達(dá)，進(jìn)而引起機(jī)體的氧化修復(fù)能力異常，從而促進(jìn)肺癌和 COPD的共同發(fā)病。