1、背景：抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantargetofrapamycin,mTOR)通路能抑制骨肉瘤活動力和降低肺轉(zhuǎn)移率,但前期臨床試驗發(fā)現(xiàn)mTOR通路抑制劑單藥治療在骨肉瘤患者中的效果不理想。缺氧可影響mTOR的活性,而mTOR活性被抑制時可影響細(xì)胞內(nèi)多種激酶通路的活性。在不同的氧濃度下,抑制mTOR通路可能產(chǎn)生了復(fù)雜的生物學(xué)效應(yīng)。
　　目的：及方法選取人骨肉瘤細(xì)胞株MG63細(xì)胞,在常氧和缺氧下,采用雷帕霉素(ra

2、pamycin,RAPA)行mTOR抑制,觀察與腫瘤表型相關(guān)的核干細(xì)胞因子(nucleostemin,NS),與生長相關(guān)的環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP-dependentresponsiveprotein,CREB)和血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的變化。
　　結(jié)果：常氧和缺氧下,與人成骨細(xì)胞株hFOB1.19細(xì)胞相比,MG63細(xì)胞的mTOR活性較高;相同濃度的

3、RAPA在相同時間下對MG63細(xì)胞的mTOR活性抑制效果相同。常氧條件下,mTOR抑制通過增強(qiáng)蛋白激酶B(proteinkinaseB,Akt)的核轉(zhuǎn)位在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上調(diào)了NS的表達(dá);Akt抑制劑wortmannin預(yù)處理逆轉(zhuǎn)了RAPA對NS的上調(diào)。缺氧通過增強(qiáng)Akt的活性上調(diào)了NS表達(dá);mTOR抑制在缺氧下對Akt的活性無影響,因此對缺氧上調(diào)NS的效應(yīng)也無影響。常氧條件下,mTOR抑制通過細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellula

4、r-signalregulatedkinase,ERK)-蛋白激酶A(cAMP-dependentkinase,PKA)通路上調(diào)了CREB的磷酸化(即phosphorlatedCREB,pCREB)和VEGF的表達(dá)。ERK抑制劑U0126預(yù)處理不僅逆轉(zhuǎn)了mTOR抑制對pCREB和VEGF的上調(diào)效應(yīng),也降低了mTOR抑制下的細(xì)胞相對增值率。而PKA抑制劑H89預(yù)處理雖也下調(diào)pCREB和VEGF,但使Akt活性增加,因此并未降低細(xì)胞相對增值