1、片形吸蟲病(Fasciolasis)是由片形屬的肝片吸蟲(Fasciola hepiffca)和大片吸蟲(Fasciola gigantica)寄生于牛、羊等多種動物的膽管和肝臟中引起的一種寄生蟲病。該病在我國分布廣泛，給畜牧業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。同時片形吸蟲的囊蚴也可感染人，嚴(yán)重危害人們的健康，是一種重要的人獸共患寄生蟲病。 本研究利用SMART cDNA文庫構(gòu)建試劑盒成功構(gòu)建了大片吸蟲成蟲cDNA文庫，文庫庫容量為2.08x

2、10<'6> pfu/mL，重組率為98﹪。擴(kuò)增后的文庫滴度為6.23x10<'9>pfu/mL，插入片段平均大小約為1000 bp。采用PCR從已構(gòu)建的DNA文庫中克隆了組織蛋白酶L1(Fasciolagigantica Cathepsin L1，F(xiàn)gCLl)編碼序列，提交GeDBank，登錄號為EF536899。FgCLl編碼序列亞克隆至原核表達(dá)載體pGEX-4T-2，重組質(zhì)粒pGEX/FgCL1在大腸桿菌BL21中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)以

3、包涵體形式表達(dá)，其分子量為61KD左右，利用High-Affinity GST Resin親和層析法進(jìn)行目的蛋白的純化，純度為77.8﹪。Western-blotting結(jié)果表明純化蛋白可以識別自然感染大片吸蟲的牛血清。 用純化的FgCLl作為包被抗原，建立了一種檢測片形吸蟲病的ELISA診斷方法，并對ELISA反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。確定抗原的最適包被濃度為4ug/rnl；血清的稀釋度為1：200，37℃作用0.5h：最佳封閉條件