1、90％的胰腺癌為具有特殊組織結(jié)構(gòu)的胰腺導(dǎo)管腺癌，癌組織缺乏功能正常的血管，且癌細(xì)胞分散在豐富的纖維間質(zhì)組織中，抗癌藥物難以滲入來(lái)發(fā)揮作用,加之藥物的快速代謝導(dǎo)致化療藥物不敏感,而全身抗癌藥物的干預(yù)治療致使胰腺癌腫瘤局部治療低效能且全身副作用大，探索一種安全高效的給藥方式將為胰腺癌治療帶來(lái)新的契機(jī)。本研究?jī)?nèi)容是依托國(guó)家自然基金面上項(xiàng)目“可視化雙靶向載dFdC金納米微囊同步UTMD增強(qiáng)胰腺癌化療效果及瞬時(shí)成像的實(shí)驗(yàn)研究”，以對(duì)人體無(wú)毒害作用

2、的生物可降解材料聚乳酸羥基乙酸－聚乙二醇(PLGA-mPEG）為骨架，將一線(xiàn)廣譜抗腫瘤藥物紫杉醇（PTX）包裹后，靶向胰腺癌高表達(dá)腫瘤標(biāo)志物CA19-9及CEA，復(fù)乳法制備形成特殊的“多空穴”結(jié)構(gòu)，探索超聲輻照微泡破裂（ultrasound targeted microbubble destruction，UTMD）在增強(qiáng)靶向載藥“多空穴”納米微囊進(jìn)入胰腺癌細(xì)胞的可行性，并進(jìn)一步篩選UTMD的優(yōu)化條件，在實(shí)現(xiàn)特異性識(shí)別、黏附靶細(xì)胞并發(fā)揮

3、抗胰腺癌治療作用的同時(shí)，利用復(fù)合納米微囊本身獨(dú)特的內(nèi)部“多空穴”特性來(lái)實(shí)現(xiàn)超聲造影增強(qiáng)顯像的實(shí)驗(yàn)研究。本研究主要完成了靶向載藥納米診療體的制備和表征,體內(nèi)外超聲造影顯像及體外抗胰腺癌治療的實(shí)驗(yàn)部分。具體內(nèi)容以三部分形式展開(kāi)：
　　第一部分、靶向載PTX PLGA-mPEG納米診療體的制備與表征
　　目的：以生物可降解有機(jī)高分子共聚物PLGA-mPEG為骨架，構(gòu)建靶向CA19-9，CEA，包裹 PTX的納米診療體。并對(duì)其粒徑分

4、布、大小形態(tài)、表面電荷及枝接抗體情況等理化特性進(jìn)行表征，并檢測(cè)PTX包封率，載藥率及體外釋放規(guī)律。
　　方法：采用復(fù)乳法制備靶向載PTX的PLGA- mPEG“多空穴”納米診療體微囊，并通過(guò)設(shè)計(jì)多因素多水平的正交實(shí)驗(yàn)對(duì)制備條件進(jìn)行優(yōu)化，方差統(tǒng)計(jì)，最終得出最優(yōu)制備條件。超細(xì)微粒粒度及電位分析儀對(duì)所構(gòu)建的靶向載 PTX納米診療體最大及平均粒徑分布及其表面所攜帶電荷進(jìn)行表征，掃描電鏡檢測(cè)其大小、形態(tài)和分散度情況，紅外光譜檢測(cè)其枝接抗體情

5、況，在進(jìn)一步對(duì)高效液相色譜法測(cè)定包封率及釋放率進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證之后，檢測(cè)納米微囊對(duì)于PTX的包封率，載藥率及體外釋放規(guī)律，驗(yàn)證納米微囊對(duì)于PTX的穩(wěn)定釋放功能，描記“時(shí)間-PTX體外釋放曲線(xiàn)”。
　　結(jié)果：通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定了制備PTX-mPEG-PLGA納米微囊4個(gè)因素(A:初乳乳化次數(shù)，B:PTX投藥比，C:油相體積，D:F-68濃度)對(duì)包封率及載藥率的影響程度，確定最佳制備工藝參數(shù)。復(fù)乳法最終成功制備靶向載PTX的PLGA-mP

6、EG“多空穴”納米微囊。粗測(cè)靶向納米診療體微囊的最大粒徑約為136.3±5.2nm，平均粒徑約為88.6±3.5nm，Zeta電位為-13.6±1.7mv，掃描電鏡證實(shí)anti-CA19-9-CEA-PTX-mPEG-PLGA靶向納米診療體微囊呈球形、表面光滑、分布均勻、無(wú)明顯團(tuán)聚現(xiàn)象，觀測(cè)得到納米微囊粒徑在粗測(cè)得到的粒徑范圍之內(nèi)。高效液相色譜法方法可靠，經(jīng)測(cè)得PTX包封率為91.32±3.25%，載藥率為2.666±0.092%。納米

7、微囊在5天內(nèi)可以持續(xù)穩(wěn)定的釋放PTX，累計(jì)釋放量達(dá)96％。紅外光譜法檢測(cè)納米微囊診療體所得光譜具有特征性的枝接抗體蛋白的光譜信息,間接證明微囊表面已修飾anti-CA19-9、anti-CEA抗體。
　　結(jié)論：復(fù)乳法可以成功制備anti-CA19-9-CEA-PTX-mPEG-PLGA靶向納米診療體，其本身具有獨(dú)特的“多空穴”結(jié)構(gòu)，及良好的包封率、載藥率、靶向性及體外持續(xù)穩(wěn)定釋放 PTX功能，理論上能達(dá)到超聲造影增強(qiáng)顯像和靶向抗胰

8、腺癌治療的要求，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)打下了良好的前期基礎(chǔ)。
　　第二部分、靶向載PTX納米診療體體外及體內(nèi)超聲造影增強(qiáng)顯像的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：評(píng)估靶向載PTX納米診療體微囊體外及體內(nèi)超聲造影增強(qiáng)顯像情況。
　　方法：彩色多普勒診斷超聲診斷儀Philips IE33，Siemens Sequaio512和LOGIQ E9（探頭L11-3，15L8W-S，ML6-14）。分為三組:第一組：5ml脫氣生理鹽水注入5ml塑料軟管并

9、封閉；84mg靶向載PTX納米診療體凍干粉放入5ml塑料軟管注入脫氣生理鹽水5ml并封閉，充分振搖；84mg SonoVue注入5ml脫氣生理鹽水并注入塑料軟管封閉,充分振搖；常規(guī)二維超聲及超聲造影模式下分別觀察3個(gè)軟管內(nèi)顯像情況。第二組：0.5ml脫氣生理鹽水經(jīng)兔耳緣靜脈快速注入,立即常規(guī)二維超聲及超聲造影模式下觀察兔腎臟顯像情況。84mg靶向載 PTX納米診療體凍干粉放入5ml塑料軟管注入脫氣生理鹽水5ml并封閉，充分振搖；84mg

10、 SonoVue注入5ml脫氣生理鹽水并注入5ml塑料軟管封閉,充分振搖；從每個(gè)軟管內(nèi)各抽取0.5ml充分搖勻經(jīng)兔耳緣靜脈快速注入,常規(guī)二維超聲及超聲造影模式下觀察兔腎臟顯像情況，記錄兔腎臟時(shí)間-強(qiáng)度曲線(xiàn)。第三組：0.2ml脫氣生理鹽水經(jīng)裸鼠尾靜脈快速注入,立即常規(guī)二維超聲及超聲造影模式下觀察裸鼠胰腺癌體表種植瘤顯像情況。84mg靶向載PTX納米診療體凍干粉放入5ml塑料軟管注入脫氣生理鹽水5ml并封閉,充分振搖；84mgSonoVue

11、注入5ml脫氣生理鹽水并注入5ml塑料軟管封閉,充分振搖;之后分別各抽取0.2ml混懸液再次充分搖勻，經(jīng)裸鼠尾靜脈快速注入,立即常規(guī)二維超聲及超聲造影模式下觀察裸鼠胰腺癌體表種植瘤顯像情況，并描記胰腺癌體表種植瘤時(shí)間-強(qiáng)度曲線(xiàn)。第四組：0.2ml脫氣生理鹽水經(jīng)裸鼠尾靜脈快速注入,立即常規(guī)二維超聲及超聲造影模式下觀察裸鼠胰腺癌原位種植瘤顯像情況。84mg靶向載PTX納米診療體凍干粉放入5ml塑料軟管注入脫氣生理鹽水5ml并封閉，充分振搖；

12、84mg SonoVue注入5ml脫氣生理鹽水并注入5ml塑料軟管封閉,充分振搖；從軟管內(nèi)各抽取0.2ml充分搖勻經(jīng)裸鼠尾靜脈快速注入，立即常規(guī)二維超聲及超聲造影模式下觀察裸鼠胰腺癌原位種植瘤顯像情況，并描記胰腺癌原位種植瘤時(shí)間-強(qiáng)度曲線(xiàn)。
　　結(jié)果:
　　1.體外超聲造影增強(qiáng)顯像：常規(guī)二維模式：脫氣水呈現(xiàn)無(wú)回聲，SonoVue呈現(xiàn)粗點(diǎn)狀增強(qiáng)回聲，靶向載 PTX納米診療體呈現(xiàn)細(xì)點(diǎn)狀增強(qiáng)回聲。超聲造影模式：超聲造影顯像(和常規(guī)

13、二維模式比較)：脫氣水呈現(xiàn)無(wú)回聲，SonoVue呈現(xiàn)多量粗點(diǎn)狀增強(qiáng)回聲,靶向載PTX納米診療體呈現(xiàn)多量細(xì)點(diǎn)狀增強(qiáng)回聲,后兩者在超聲造影模式下顯像均較常規(guī)二維模式下偏強(qiáng)。
　　2.體內(nèi)超聲對(duì)比增強(qiáng)顯像:(1)兔腎:脫氣生理鹽水在超聲造影模式下無(wú)對(duì)比增強(qiáng)顯像。載PTX納米診療體和SonoVue對(duì)于兔腎達(dá)到充盈高峰時(shí)兩者增強(qiáng)顯像效果均較好，動(dòng)態(tài)造影過(guò)程：①靶向載PTX納米診療體混懸液注入后約5秒鐘開(kāi)始充盈，24秒快速達(dá)到高峰之后維持約6

14、秒，約30秒時(shí)快速消退，到48秒開(kāi)始緩慢消退，約8分鐘才基本完全消退。② SonoVue混懸液注入后約3秒鐘開(kāi)始充盈，28秒快速達(dá)到高峰，之后維持約8秒，快速消退，約47秒時(shí)開(kāi)始緩慢消退，在5分鐘之內(nèi)基本消退完全。靶向載 PTX納米診療體達(dá)峰時(shí)間較SonoVue略提前，但峰值較SonoVue略偏低，消退較SonoVue減慢。(2)裸鼠胰腺癌體表種植瘤:脫氣生理鹽水在超聲造影模式下無(wú)對(duì)比增強(qiáng)顯像。靶向載PTX納米診療體和SonoVue對(duì)于

15、裸鼠胰腺癌體表種植瘤達(dá)到充盈高峰時(shí)兩者增強(qiáng)顯像效果均較好。動(dòng)態(tài)造影過(guò)程：①靶向載 PTX納米診療體混懸液注入后瘤體約8秒快速充盈，從外周向中心向心性充盈，約33秒左右充盈完全，之后先快速消退，再緩慢消退，約10分鐘仍有散在星點(diǎn)狀回聲。② SonoVue混懸液注入后瘤體約5秒鐘開(kāi)始充盈，從外周向中心呈向心性充盈，約35秒充盈達(dá)峰，維持大約6秒鐘，之后先快速消退，再緩慢消退，約9分50秒左右基本消退完全。靶向載PTX納米診療體和SonoVu

16、e在造影充盈過(guò)程中均呈快速充盈，達(dá)峰時(shí)間基本一致，充盈強(qiáng)度前者較后者略低一點(diǎn)，消退時(shí)納米診療體較SonoVue減慢，呈緩慢消退的過(guò)程，顯示納米診療體在瘤體中呈現(xiàn)明顯滯留時(shí)間延長(zhǎng)。(3)裸鼠胰腺癌原位種植瘤:脫氣生理鹽水在超聲造影模式下無(wú)對(duì)比增強(qiáng)顯像。靶向載PTX納米診療體和SonoVue對(duì)于裸鼠胰腺癌原位種植瘤達(dá)到充盈高峰時(shí)兩者增強(qiáng)顯像效果均較好，且靶向載PTX納米診療體較SonoVue充盈強(qiáng)度更強(qiáng)，尤其對(duì)于原位瘤瘤體內(nèi)的充盈。動(dòng)態(tài)造影

17、過(guò)程:①靶向載 PTX納米診療體混懸液注入后周?chē)爸行募s33秒同時(shí)開(kāi)始充盈至70秒快速充盈達(dá)峰，之后開(kāi)始消退，約150秒消退速度明顯減慢，至約10分鐘，原位瘤的強(qiáng)度仍約為1/3最大充盈強(qiáng)度，一直至約14分鐘，瘤體內(nèi)仍有星點(diǎn)狀回聲未消退。②SonoVue混懸液注入后瘤體周?chē)爸行募s30秒同時(shí)開(kāi)始充盈，至60秒全部充盈，維持約8秒鐘，開(kāi)始快速消退，約110秒消退速度減慢，至10分鐘接近消退完全。靶向載PTX納米診療體和SonoVue在造影充

18、盈過(guò)程中均呈快速充盈，達(dá)峰時(shí)間基本一致，充盈強(qiáng)度前者較后者略增強(qiáng)，消退時(shí)納米診療體較SonoVue減慢，呈緩慢消退的過(guò)程。
　　結(jié)論：靶向載PTX納米診療體和SonoVue在體外及兔腎、裸鼠胰腺癌體表及原位種植瘤超聲造影增強(qiáng)顯像效果均較好，靶向載PTX納米診療體較SonoVue消退時(shí)間明顯延長(zhǎng)，在裸鼠體內(nèi)胰腺腫瘤有明顯的滯留現(xiàn)象，相對(duì)延長(zhǎng)了PTX在腫瘤等靶組織停留的時(shí)間，為今后抗腫瘤治療提供了一定的治療基礎(chǔ)。
　　第三部分、

19、優(yōu)化后UTMD促進(jìn)靶向載PTX納米診療體體外抗胰腺癌的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：
　　1.篩選增強(qiáng)納米微囊進(jìn)入胰腺癌細(xì)胞的UTMD優(yōu)化條件。
　　2.有/無(wú)優(yōu)化UTMD作用下，不同時(shí)間點(diǎn)胰腺癌細(xì)胞對(duì)于納米微囊的攝取情況，觀察被動(dòng)靶向、主動(dòng)靶向、物理靶向及聯(lián)合靶向促進(jìn)納米微囊進(jìn)入胰腺癌細(xì)胞情況。
　　3.檢測(cè)納米材料及超聲/加微泡對(duì)于細(xì)胞的毒性作用。
　　4.UTMD介導(dǎo)靶向載PTX納米診療體殺死胰腺癌細(xì)胞的體外抗

20、腫瘤作用。
　　方法：
　　1.根據(jù)課題組前期工作基礎(chǔ)及文獻(xiàn)報(bào)道，設(shè)定20個(gè)篩選條件，將包載FITC的靶向納米微囊與CFAPC-1胰腺癌細(xì)胞共同孵育，即刻分別依次進(jìn)行每個(gè)篩選條件的干預(yù)，干預(yù)完馬上觀察細(xì)胞狀態(tài)并且上機(jī)進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，在細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好的前提之下，篩選出胰腺癌細(xì)胞對(duì)于納米微囊的最大攝取率所對(duì)應(yīng)的UTMD條件即最優(yōu)UTMD條件。
　　2.使用倒置熒光顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡，流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)在優(yōu)化超聲條件

21、/加微泡作用下促進(jìn)靶向/非靶向載RhB納米微囊進(jìn)入胰腺癌細(xì)胞的情況。(1)被動(dòng)及主動(dòng)靶向性分組:①空白對(duì)照組:檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h;②游離羅丹明組(RhB)：檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h;③非靶向載RhB納米微囊組(NCs)：檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h;④靶向載RhB納米微囊組(NCs-T):檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h。(2)物理及聯(lián)合靶向性分組：①單純游離Rh

22、B組：檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h;②RhB+US組:檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h;③RhB+UTMD組:檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h;④單純非靶向包載RhB納米微囊(NCs)組：檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn):6h，12h，24h，48h;⑤非靶向包載RhB納米微囊(NCs)+US組：檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn):6h，12h，24h，48h;⑥非靶向包載RhB納米微囊(NCs)+UTMD組：檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn):6h，1

23、2h，24h，48h;⑦單純靶向包載RhB納米微囊(NCs-T)組:檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h;⑧靶向包載RhB納米微囊(NCs-T)+US組:檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h;⑨靶向包載RhB納米微囊(NCs-T)+UTMD組:檢測(cè)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)：6h，12h，24h，48h。
　　3. MTT法檢測(cè)：不同條件下空納米微囊材料和胰腺癌細(xì)胞孵育24h，48h后細(xì)胞增殖情況，及優(yōu)化超聲/加微泡干預(yù)下24h，

24、48h后胰腺癌細(xì)胞增殖情況。具體分組：①單純PLGA-mPEG空白納米微囊24h組，② PLGA-mPEG空白納米微囊+ US24h組，③ PLGA-mPEG空白納米微囊+UTMD24h組，④單純PLGA-mPEG空白納米微囊48h組，⑤PLGA-mPEG空白納米微囊+US48h組，⑥PLGA-mPEG空白納米微囊+UTMD48h組，⑦PBS24h組，⑧SonoVue24h組4. CCK-8法檢測(cè)24h后，48h后不同分組條件下胰腺癌細(xì)

25、胞增殖情況。具體分組：(1)24h：①單純PTX組，②PTX+US組，③PTX+UTMD組，④單純PTX-NCs組，⑤PTX-NCs+US組，⑥PTX-NCs+UTMD組，⑦單純PTX-NCs-T組，⑧PTX-NCs-T+US組，⑨PTX-NCs-T+UTMD組，⑩空白對(duì)照組；(2)48h：①單純PTX組，②PTX+US組，③PTX+UTMD組，④單純PTX-NCs組，⑤PTX-NCs+US組，⑥PTX-NCs+UTMD組，⑦單純PTX

26、-NCs-T組，⑧PTX-NCs-T+US組，⑨PTX-NCs-T+UTMD組，⑩空白對(duì)照組
　　結(jié)果：
　　1.優(yōu)化UTMD條件篩選：超聲輻照功率/輻照時(shí)間/SonoVue體積比:1w/cm2/60s/40%條件下胰腺癌細(xì)胞攝取率最大為：39.67±2.45%。
　　2.靶向性驗(yàn)證：
　　(1)被動(dòng)靶向性：6h-12h-24h-48h:(RhB)組：隨時(shí)間推移，進(jìn)入細(xì)胞快速，至12h達(dá)峰，之后細(xì)胞內(nèi)熒光減退，逐

27、漸析出。游離RhB12h細(xì)胞攝取率在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)中最高，較6h具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。(NCs)組：隨時(shí)間推移，進(jìn)入細(xì)胞緩慢增加，至48h達(dá)峰。(NCs)組：細(xì)胞48h攝取率在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)中最高，較6h具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。(NCs-T)組：隨時(shí)間推移，進(jìn)入細(xì)胞緩慢增加，至48h達(dá)峰。NCs-T細(xì)胞48h攝取率在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)中最高，較6h具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　(2)主動(dòng)靶向性：6h：(RhB

28、)組：細(xì)胞攝取率4組中最高；(NCs)組：細(xì)胞攝取率較(RhB)組略低；(NCs-T)組：細(xì)胞攝取率較(NCs)組略高。12h：(RhB)組：細(xì)胞攝取率4組中最高；(NCs-T)組：細(xì)胞攝取率較(NCs)組高。24h：(RhB)組：細(xì)胞攝取率4組中最低；(NCs)組：細(xì)胞攝取率較(RhB)組高；(NCs-T)組：細(xì)胞攝取率較(NCs)組增高。48h后:(RhB)組：細(xì)胞攝取率4組中最低；(NCs)組：細(xì)胞攝取率較(RhB)組高；(NCs

29、-T)組：細(xì)胞攝取率較(NCs)組明顯增高，并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　(3)物理靶向性：各時(shí)間點(diǎn)，細(xì)胞對(duì)于納米微囊攝取率的影響，UTMD和US兩者較沒(méi)有US作用下細(xì)胞攝取率均增高，在6h，24h和48h為著，并均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，UTMD和US比較，兩者在提高細(xì)胞攝取率上沒(méi)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　(4)聯(lián)合靶向性：(NCs-T)組較(NCs)組，細(xì)胞攝取率增高，以48h為著，而(N

30、Cs-T+US)組及(NCs-T+UTMD)組較(NCs-T)組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞攝取率進(jìn)一步增高，以12h，24h和48h為著,并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著性差異(P<0.05)。
　　3.在PBS，SonoVue，空納米微囊，空納米微囊+優(yōu)化US條件，空納米微囊+優(yōu)化UTMD條件各組干預(yù)24h及48 h之下，胰腺癌細(xì)胞的增殖率均在90%之上，各組之間沒(méi)有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　4.CCK-8實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證靶向載藥納米診療體體外

31、抗腫瘤效果：
　　(1) PTX裸藥組、PTX-NCs組、PTX-NCs-T組三組，在分別與胰腺癌細(xì)胞孵育24h和48h之后，每組細(xì)胞存活率隨藥物濃度的增加，逐漸呈下降趨勢(shì)。
　　(2)PTX裸藥組在48h細(xì)胞存活率較24h每個(gè)對(duì)應(yīng)濃度降低，但降低幅度較小，PTX-NCs組及PTX-NCs-T組48h細(xì)胞存活率較24h每個(gè)對(duì)應(yīng)濃度降低，但降低幅度較大，和PTX裸藥組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　(3) PTX

32、裸藥組、PTX-NCs組、PTX-NCs-T組三組分別在US及UTMD干預(yù)之下，每組細(xì)胞存活率隨載藥物濃度的增加，均呈逐漸下降趨勢(shì)。
　　(4)分別在24h和48h，PTX-NCs+US組及PTX-NCs+UTMD組較單純PTX-NCs組細(xì)胞存活率對(duì)應(yīng)濃度有較大幅度下降（P<0.05）；PTX-NCs-T+US組及PTX-NCs-T+UTMD組較單純PTX-NCs-T組細(xì)胞存活率對(duì)應(yīng)濃度有較大幅度下降（P<0.05）。
　　

33、(5)分別在24h和48h，PTX-NCs+US組及PTX-NCs+UTMD組兩組間對(duì)應(yīng)濃度細(xì)胞存活率無(wú)顯著性差異。（P>0.05）；PTX-NCs-T+US組及PTX-NCs-T+UTMD組兩組間對(duì)應(yīng)濃度細(xì)胞存活率無(wú)顯著性差異。（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.優(yōu)化的US及UTMD條件下，可以在保證細(xì)胞存活率的前提下，有效促進(jìn)靶向納米微囊進(jìn)入胰腺癌細(xì)胞。
　　2.
　?、賀hB在24h之后隨時(shí)間推移而進(jìn)入

34、細(xì)胞逐漸減少，可能因?yàn)樾》肿恿康娜玖戏肿涌梢宰杂蛇M(jìn)出細(xì)胞膜，所以隨時(shí)間推移，進(jìn)入細(xì)胞的一部分又從細(xì)胞內(nèi)游弋出來(lái)。而非靶向載PTX納米微囊因其足夠小巧的粒徑具有被動(dòng)靶向的功能，從而隨時(shí)間的延長(zhǎng)而持續(xù)地進(jìn)入細(xì)胞增多。靶向載 PTX納米微囊較非靶向納米微囊進(jìn)入細(xì)胞增多，和靶向的抗原-抗體尋靶結(jié)合有一定關(guān)系，且無(wú)論是靶向還是非靶向納米微囊的粒徑相對(duì)于羅丹明染料分子來(lái)說(shuō)大很多，不易從細(xì)胞內(nèi)游弋出來(lái)。這與納米微囊在之前裸鼠體內(nèi)顯像的停留時(shí)間延長(zhǎng)相一

35、致。
　?、赨S及UTMD可以明顯增強(qiáng)靶向及非靶向納米微囊進(jìn)入細(xì)胞，除與“聲孔效應(yīng)”直接相關(guān)，可能還和其他一些廣泛研究的不完全明了的一些機(jī)制有關(guān).
　?、鄱鳸S和UTMD對(duì)于促進(jìn)納米微囊進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的效能比較接近，是否和超聲輻照作用之下形成可逆性聲孔的飽和度相關(guān)。
　　3.MTT試驗(yàn)結(jié)果顯示PLGA-mPEG材料、優(yōu)化的US、優(yōu)化的UTMD作用下細(xì)胞存活率基本在90%以上，表明所使用PLGA-mPEG材料、SonoVu