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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
篩選和鑒定骨肉瘤發(fā)病相關(guān)的基因,揭示骨肉瘤發(fā)病的分子機(jī)制。
方法:
收集3例手術(shù)切除骨肉瘤新鮮組織標(biāo)本,及患者正常血清作為對(duì)照,提取組織總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄及標(biāo)記,再與Affymetrix基因芯片雜交,采用經(jīng)驗(yàn)貝葉斯法篩選出骨肉瘤發(fā)病的差異表達(dá)基因;經(jīng)對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行Gene ontology注釋并對(duì)其分子功能、生物學(xué)途徑及信號(hào)通路富集分析,從中選擇3個(gè)基因;最后用RT-PCR和Western bl
2、ot驗(yàn)證部分基因的表達(dá)。
結(jié)果:
基因芯片篩選到105個(gè)骨肉瘤發(fā)病的差異表達(dá)基因,其中在骨肉瘤中表達(dá)上調(diào)的42個(gè),下調(diào)的63個(gè);骨肉瘤發(fā)病的差異表達(dá)基因主要分子功能為蛋白質(zhì)結(jié)合等。分布的生物學(xué)途徑為免疫應(yīng)答、補(bǔ)體活化及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等。主要參與的信號(hào)通路為免疫應(yīng)答、細(xì)胞活力、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)及負(fù)調(diào)控細(xì)胞凋亡等;RT-PCR和Western blot驗(yàn)證BAX、HMMR和SHB基因的表達(dá),結(jié)果與芯片結(jié)果相符。
結(jié)論:
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