1、椎間盤退變性疾病包括許多種疾病，給人類健康帶來沉重負擔，然而，目前所有的治療方式都針對的是椎間盤退變造成的癥狀的緩解，而并非椎間盤退變本身。治療椎間盤退變的一個可能的方法就是將采用基因治療的方法將目的基因?qū)胱甸g盤內(nèi)。 目的： (1)建立可靠的、可重復的椎間盤退變的動物模型； (2)構(gòu)建含有人類重組BMP-7基因的腺病毒載體；(3)將該腺病毒載體導入新西蘭大白兔椎間盤內(nèi)，觀察BMP-7對新西蘭大白兔受損椎間盤的影

2、響。 方法： (1)：健康新西蘭大白兔6只，將L3/4作為對照椎間盤，不進行針刺也不進行暴露；L4/5作為假手術(shù)椎間盤，只進行暴露而不進行針刺；L5/6椎間盤作為手術(shù)椎間盤，手術(shù)暴露后用24G針頭從椎間盤的前外側(cè)針刺三次。觀察4周后其椎間盤高度、MRI信號改變、髓核含水量、髓核s-GAG含量等變化，對椎間盤進行組織學觀察，了解受損椎間盤的改變。 (2)采用共轉(zhuǎn)染的方法構(gòu)建成功pAd-BMP7重組腺病毒，293細胞

3、包裝、擴增和純化后對重組腺病毒DNA進行PCR檢測及酶切鑒定，將鑒定好的病毒克隆進一步擴增、純化和測定滴度。驗證其使用的安全性 (3)取新西蘭大白兔4只，將BMP-7基因的腺病毒載體注射入新西蘭大白兔椎間盤內(nèi)，3天后通過RT-PCR、westernblot觀察BMP-7的表達情況。取新西蘭大白兔20只，將L3/4椎間盤刺傷后注入20μl生理鹽水；L4/5椎間盤刺傷后注入20μl的Ad-BMP7；3、L5/6留做對照。在術(shù)后2周、

4、4周、8周、12周，測量椎間盤高度、MRI信號強度、髓核含水量、髓核s-GAG含量，觀察BMP-7對新西蘭大白兔受損椎間盤在這些方面的影響。 結(jié)果：(1)針刺損傷椎間盤4周后，與L3/4、L4/5椎間盤相比，L5/6椎間盤在椎間盤高度、MRI信號強度、髓核含水量、髓核s-GAG含量降低，HE染色證明L5/6椎間盤有退變性征象發(fā)生。 (2)成功構(gòu)建了腺病毒載體，經(jīng)測定其滴度為1.2×1012PFU/ml。 (3)注

5、射BMP-7的腺病毒載體，三天后就有BMP-7表達。在術(shù)后2周、4周、8周、12周，BMP-7基因腺病毒載體注射的L4/5椎間盤在椎間盤高度、MRI信號強度、髓核含水量、髓核s-GAG含量方面與L3/4椎間盤相比都能改善受損傷椎間盤的情況，接近L5/6正常椎間盤水平。 結(jié)論：針刺損傷椎間盤退變動物模型是一種可靠的動物模型，具有很好的重復性。用BMP-7基因的腺病毒載體對受損傷的新西蘭大白兔椎間盤進行基因治療，可以很好的延緩受損椎