基于油酸誘導的高產三萜靈芝菌絲體發(fā)酵及生物合成途徑中關鍵酶編碼基因研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、靈芝是一種具有重要經濟價值的大型藥用真菌。從靈芝中提取出的多糖、萜類、甾醇類以及生物堿類物質被發(fā)現具有抗癌、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、抗菌、抗真菌、抗膽堿酯酶、抗炎、抗免疫調節(jié)活性等多種生物活性。本文主要研究三萜這一靈芝中的重要活性物質。
  油酸作為一種外源性物質可以誘導靈芝高產三萜。本文對油酸促進靈芝菌絲體高產靈芝三萜發(fā)酵條件進行了優(yōu)化。實驗結果表明,促進靈芝菌絲體高產靈芝三萜的最優(yōu)結果為:培養(yǎng)基成分為可溶性淀粉3.4%、魚蛋白

2、胨0.72%、KH2PO40.3%、MgSO40.15%、VB10.005%(m/v),pH5.5,在發(fā)酵培養(yǎng)第0d加油酸4.38%(v/v);裝液量為100 mL,接種量為10%(v/v),發(fā)酵周期為9d,胞內三萜產量達到(287.67±3.77) mg/100 mL。
  本文利用HPLC-ESI-MSn檢測靈芝三萜,初步鑒定出了11種不同的三萜化合物,包括:Ganoderic acid C2、Lucidenic acid N

3、、Ganoderenic acid B、7,15-dihydroxy-4,4,14-trimethyl-3,11-dioxochol-8-en-24-oic acid、Ganoderic acidA、Ganolucidic acid A、Lucidenic acid A、Ganoderic acid D、Lucidenic acid D、Ganolucidic acid D、Ganoderic acid J。并對其進行了油酸誘導后產量變

4、化的實驗分析,發(fā)現大部分種類的靈芝三萜可以被油酸誘導使產量提高。
  本文通過實時熒光定量PCR技術考察了油酸誘導對靈芝三萜生物合成途徑中關鍵酶基因轉錄水平的影響。結果表明,油酸可使SQS和CYP51這兩個靈芝三萜生物合成途徑中的關鍵酶基因上調表達,從而使靈芝菌絲體胞內三萜產量大幅度提高。油酸對14α-LDM酶基因主要為抑制作用,從而抑制麥角甾醇這一代謝途徑,間接提高靈芝三萜產量。
  本文通過發(fā)酵罐對靈芝進行擴大培養(yǎng),并將

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