1、背景與目的：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是導(dǎo)致人類急性和慢性肝臟疾病的重要病原體。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，全球約20億人感染過HBV，其中3～4億人為慢性HBV攜帶者。在全球疾病前10位死亡原因中，乙型肝炎占第七位。全球每年約有100萬人死于由HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）。中國是HBV感染高流行區(qū)，2002年中國人群的乙型肝炎表面抗原

2、（hepatitis B surface antigen，HBsAg）標化陽性率為9．09％，HBV標化流行率為50．04％。2006年我國衛(wèi)生部對全國人群乙肝血清流行病學(xué)的調(diào)查結(jié)果顯示：全國1～59歲人群HBsAg攜帶率為7．18％，全國人群乙肝抗體陽性率為50．09％，慢性乙型肝炎中，肝硬化失代償?shù)哪臧l(fā)生率約3％，5年累計發(fā)生率約16％，其中6％～15％可發(fā)展為肝細胞癌（HCC）。因此，HBV感染是中國也是世界的重要公共衛(wèi)生問題。

3、 乙型肝炎病毒DNA（HBV DNA）是反映HBV復(fù)制活躍程度及傳染性的最直接的指標，也是觀察抗病毒藥物療效、預(yù)后及指導(dǎo)抗病毒藥物應(yīng)用的最重要指標之一。研究發(fā)現(xiàn)基線水平HBV DNA與肝硬化發(fā)生密切相關(guān)，與肝細胞肝癌的發(fā)生表現(xiàn)為明顯的“劑量--效應(yīng)”關(guān)系，持續(xù)高病毒載量是乙肝病情進展的主要原因。HBV DNA定量的檢測從根本上突破了免疫學(xué)方法等間接檢測方法的局限性，通過直接檢測病毒核酸水平，可真實地反映患者體內(nèi)病毒的水平。目前HB

4、V DNA定量檢測方法主要有兩類，一類是以聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）為基礎(chǔ)，如實時熒光定量PCR（FQ-PCR）等。另一類是以核酸雜交為基礎(chǔ)，如斑點雜交和液相雜交等。美國FDA批準、國際公認HBV DNA定量的檢測方法是羅氏公司生產(chǎn)的在國際上具有參比價值的COBAS Amplicor等HBV DNA定量檢測方法，由于其試劑價格昂貴，且必須采用羅氏公司專用PCR儀，故在我國難以廣泛使用。目前，我國SFDA已批準多個實時FQ-PCR試劑用于HB

5、V DNA檢測，但與國際上公認的COBAS Amplicor試劑在檢測結(jié)果上的差異尚不明確。 為了了解目前我國國產(chǎn)實時FQ-PCR試劑與COBAS Amplicor試劑檢測HBV DNA的差異，進行了本研究。 材料和方法：本研究于2007年12月～2008年4月期間，對山東省17地市32家醫(yī)療機構(gòu)的實驗室應(yīng)用的國產(chǎn)FQ-PCR試劑進行了調(diào)查。其中，國產(chǎn)試劑A占34％，B試劑占50％，其余試劑共占16％。于2008年4月～

6、6月期間，本研究組根據(jù)羅氏COBAS Amplicor方法的檢測結(jié)果，從某藥物臨床試驗保存的系列慢性乙型肝炎（CHB）血清標本中抽取了151份標本，其中HBV DNA<300copies/mL者16份，≥300且<103copies/mL者24份，≥103且<103copies/mL者39份，≥105且<107copies/mL者47份，≥107copies/mL者25份。分別采用國產(chǎn)試劑A和試劑B對其進行了HBV DNA平行檢測，分析

7、了兩種國產(chǎn)試劑的敏感度、特異度及其與羅氏COBAS Amplicor方法檢測結(jié)果的相關(guān)性。同時，為了分析國產(chǎn)試劑的穩(wěn)定性，我們抽取其中11份血清樣本用試劑A和試劑B進行了復(fù)核。實驗結(jié)果采用SPSS統(tǒng)計軟件進行分析。 結(jié)果：151份標本中，有103份全部3種試劑檢測均有檢測值（Ct值）報告，其余48份至少1種試劑無Ct值結(jié)果報告。對這103份標本的檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析顯示：羅氏COBAS Amplicor、試劑A、試劑B的檢測結(jié)果

8、（均數(shù)±標準差，log10copies/mL）分別為（5．87±1．64）、（5．11±1．34）、（4．93±1．35）log10copies/mL，試劑A、試劑B與COBAS Amplicor檢測結(jié)果的相關(guān)系數(shù)分別為0．947、0．937。3種試劑檢測結(jié)果總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=12．32，P<0．05），試劑A、試劑B與COBAS Amplico的檢測結(jié)果的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0．05）。對低HBV載量（≥103且<105co

9、pies/mL）標本檢測的結(jié)果，試劑A、試劑B與COBAS Amplicor的相關(guān)性較低（相關(guān)性分別為：0．609，0．422）。以COBAS Amplicor檢測結(jié)果為準，試劑A、試劑B的總體靈敏度分別為90．4％、77．0％，總體特異度分別為56．3％、100％。11份復(fù)核樣本的檢測結(jié)果與初測結(jié)果的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：國產(chǎn)試劑A、B檢測結(jié)果雖與羅氏COBAS Amplicor方法檢測結(jié)果仍有一定差異，但是相關(guān)性較好，且

10、穩(wěn)定性良好。這兩種試劑的檢測結(jié)果能基本反映血清HBV DNA的水平，有助于臨床醫(yī)師了解慢性乙型肝炎患者體內(nèi)病毒復(fù)制水平和抗病毒治療的效果。試劑A、B與COBAS Amplicor的相關(guān)性在低HBV載量標本較高HBV載量標本低，提示試劑A、B檢測HBV DNA的線性范圍較窄，對低載量的HBV DNA的定量結(jié)果可靠性差。因此用于監(jiān)測抗病毒療效時，需綜合考慮生化學(xué)和免疫學(xué)指標。尤其當(dāng)HBV載量低時應(yīng)結(jié)合血清標志物檢測和其他檢查結(jié)果以及臨床表現(xiàn)

11、綜合判斷以排除假陽性與假陰性；必要時要及時復(fù)查HBV DNA。試劑A靈敏度較B高，但假陽性率高；試劑B的特異度高，但假陰性多見。在HBV載量較低時試劑A誤檢多，試劑B漏檢多。這說明國產(chǎn)試劑與羅氏COBAS Amplicor相比還存在差距。醫(yī)院在選擇國產(chǎn)HBV DNA試劑時，應(yīng)盡量選用同一種試劑；臨床醫(yī)師在動態(tài)觀察HBV DNA水平、判定療效和監(jiān)測早期耐藥發(fā)生時，應(yīng)盡量參考同一醫(yī)院和同一種試劑的檢測結(jié)果，必要時可用COBAS Amplic