1、目的：DEK蛋白是一種染色質(zhì)架構(gòu)蛋白，宮頸癌中DEK蛋白的水平明顯高于正常子宮頸細(xì)胞，在多種腫瘤中也表現(xiàn)出特異性的過(guò)表達(dá)，近年來(lái)其受到了極大的關(guān)注。隨著研究的深入，DEK蛋白的研究正一步步的深入，但有關(guān)其作用機(jī)理仍不十分清楚。我們希望通過(guò)研究DEK蛋白與在腫瘤中人們關(guān)注較多的端粒酶的關(guān)系，來(lái)進(jìn)一步揭示DEK蛋白在腫瘤中的作用機(jī)制。
　　方法：我們選取了Hela細(xì)胞系作為研究對(duì)象，利用pcDNA3.1構(gòu)建了帶有His標(biāo)簽的pcDNA

2、3.1-DEK的真核表達(dá)載體，并利用Roche公司的FuGENE HD將其轉(zhuǎn)染到Hela細(xì)胞中；同時(shí)通過(guò)公司合成了針對(duì)DEK癌基因的shRNA載體，其分別可以在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)不同的siRNA，針對(duì)DEK癌基因進(jìn)行基因沉默。
　　在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)條件確定的基礎(chǔ)上，我們利用Western Blot與免疫組織化學(xué)檢測(cè)了處理后細(xì)胞的DEK蛋白水平，并利用TRAP-PCR試劑盒檢測(cè)了端粒酶的活性。同時(shí)采用熒光定量PCR的方法，檢測(cè)了DEK基因與hTE

3、RT基因的mRNA水平，以期確定這兩者的關(guān)系。同時(shí)檢測(cè)了p53基因和MCL-1基因的表達(dá)情況，希望揭示這兩個(gè)腫瘤相關(guān)基因與DEK蛋白及端粒酶的內(nèi)在聯(lián)系。
　　結(jié)果：通過(guò)Western Blot和免疫組織化學(xué)成功檢測(cè)到DEK蛋白在Hela細(xì)胞內(nèi)的過(guò)量表達(dá)，同時(shí)，檢測(cè)到轉(zhuǎn)染shRNA載體后DEK蛋白在Hela細(xì)胞中的降低。端粒酶活性檢測(cè)未能看到Hela細(xì)胞內(nèi)明顯的端粒酶活性。通過(guò)熒光定量PCR，可以看到DEK升高時(shí)，hTERT與p53