1、雌激素是一種作用廣泛的類固醇類激素，對生殖系統(tǒng)、乳腺、骨骼及心血管系統(tǒng)生長發(fā)育功能有調節(jié)作用。雌激素的活性失調可導致相關性腫瘤及疾病的發(fā)生。已有研究顯示，雌激素受體在諸多腫瘤組織和細胞株中均有表達，如生殖系統(tǒng)腫瘤、乳腺癌、子宮內膜癌、卵巢癌、消化系統(tǒng)腫瘤、泌尿系統(tǒng)腫瘤、頭頸部腫瘤、血液系統(tǒng)腫瘤等。乳腺癌被認為是女性最常見的惡性腫瘤之一。近年來研究發(fā)現(xiàn)，內源性雌激素水平持續(xù)增高或外源性補充雌激素均可使乳腺癌發(fā)病率明顯增加。體外研究也表明雌

2、激素促進乳腺細胞的轉化和雌激素受體陽性乳腺腫瘤細胞的增殖與侵襲。
　　 雌激素主要是通過與雌激素受體(estrogen receptor，ER)結合起來發(fā)揮作用。ER有兩種作用模式，經(jīng)典的作用模式是雌激素與雌激素受體結合，通過靶基因上游的雌激素反應元件(estrogen reactive element，ERE)調控靶基因的轉錄，這種機制被稱為雌激素的基因組作用模式(或稱核啟動的雌激素應答)，需要雌激素與ER形成復合體后轉移至細

3、胞核才能發(fā)揮作用，同時ER還可以通過招募共激活因子的途徑與其他一些調控細胞增殖的轉錄因子，如AP-1和c-Jun等相互作用激活一些基因的轉錄。雌激素還存在非基因組作用模式(或稱膜啟動的雌激素應答)，通過分布于細胞膜的雌激素結合蛋白，激活細胞內信號，從而改變胞內蛋白功能和調控基因表達。
　　 目前已發(fā)現(xiàn)的與人類相關的雌激素受體亞型為ERα和ERβ兩種亞型。而由于ERα和ERβ兩種亞型配體結合區(qū)氨基酸系列同源性只為55％，該配體結合

4、區(qū)氨基酸系列差異是ERα和ERβ兩種亞型各自具有獨物特轉錄作用的關鍵。使得ERα和ERβ具有不同的調節(jié)基因轉錄活性，最終發(fā)揮不同的臨床作用。ERα主要是作為基因轉錄的激動劑，而ERβ主要是作為基因轉錄的抑制劑。在ER亞型的表達對乳腺癌的預后的研究中，ERα與預后呈正相關是被普遍認可的，研究認為ERα水平上調，促進腫瘤壞死因子(TGF)-α表達，從而促進腫瘤發(fā)生。而在子宮內膜癌的發(fā)生發(fā)展中，ERα、ERβ兩者在其發(fā)展過程中作用相反。

5、>　　 ATP不僅是一種貯能、供能物質，還是一種細胞間信息傳遞物質，通過激活P2X(配基門控性非選擇性陽離子通道，7個亞型)和P2Y(G一蛋白耦聯(lián)，8個亞型)受體而產(chǎn)生廣泛的生物學效應。P2X7受體因其獨特的結構和功能，是近年研究的熱點。其受體廣泛表達在多種組織，生理功能呈多樣性。包括過氧化物和NO的生成，T細胞的激活和成熟，誘導細胞產(chǎn)生炎癥細胞因子，誘導淋巴細胞形成膜泡等。P2X7受體的異常表達與腫瘤、炎癥等相關。大量的研究發(fā)現(xiàn)，P

6、2X7受體廣泛表達在上皮性腫瘤組織或細胞中：1)腫瘤組織或細胞中的表達明顯高于對應正常組織或細胞，如甲狀腺癌、前列腺癌等；2)腫瘤組織或細胞中的表達明顯低于對應正常組織或細胞，如外胚層來源的皮膚、泌尿生殖竇的膀胱及宮頸陰道部以及苗勒管來源的內宮頸和子宮內膜部。
　　 2002年，Carley等對大鼠膀胱中P2X受體的研究結果顯示：去卵巢大鼠膀胱中P2X3受體表達明顯增加。本實驗室前期的研究發(fā)現(xiàn)，在結直腸至炎情況下，雌激素促進大鼠

7、背根神經(jīng)節(jié)P2X3 mRNA的表達，而下調P2Y1 mRNA的表達。提示雌激素可能對ATP受體的表達和功能有調節(jié)作用。因而我們推測在雌激素依賴的腫瘤細胞中，雌激素可能也對ATP受體的表達有調節(jié)作用，從而來影響細胞的生長分化、增殖凋亡。但迄今為止，這方面的研究國內外尚未見報道。
　　 已有研究發(fā)現(xiàn)，基于以上的推測，我們想通過對雌激素依賴性腫瘤細胞中ATP受體的研究，以及雌激素對ATP受體及細胞內信號轉導的調節(jié)作用，將為闡明雌激素對

8、惡性腫瘤的發(fā)生及發(fā)展的作用提供新的線索；為研制新一代的抗腫瘤藥物提供實驗依據(jù)。
　　 目前僅有乳腺癌的ER研究較為深入，對于乳腺癌，雌激素受體是它的生物學標志物，是目前比較可靠的指導治療和判定乳腺癌預后的重要指標。同時已有的研究發(fā)現(xiàn)：1)乳腺癌細胞MCF-7本身可以分泌ATP，2)外源性ATP可以抑制乳腺癌腫瘤細胞的生長。
　　 故本實驗先以ER(+)乳腺癌細胞MCF-7為模型，觀察細胞上P2X7受體的表達和對細胞的生長

9、的作用，以及雌激素可能通過對P2X7受體表達的調節(jié)功能從而來影響細胞的生長分化、增殖凋亡。以雌激素與ATP受體的相互關系的基礎研究為前提，為我們后續(xù)進行激素依賴性腫瘤(如子宮內膜癌、卵巢癌)的研究提供理論基礎，和為更好地開展臨床治療和評估預后提供對策及抗腫瘤新藥研發(fā)提供合理的靶向。
　　 第一部分乳腺癌中P2X7受體的表達
　　 目的：研究乳腺癌中P2X7受體的表達與ER受體的相關性。
　　 方法：為了明確乳腺癌

10、中P2X7受體表達與雌激素受體的相關性，我們對臨床收集的乳腺癌石蠟切片標本包括乳腺浸潤性導管癌及癌旁正常組織(乳腺癌又分ER陽性,ER陰性)共64例進行了P2X7受體的免疫組化檢測。
　　 結論：乳腺導管癌中P2X7受體的表達與雌激素受體ER的表達，呈正相關性。
　　 第二部分乳腺癌細胞MCF-7中P2X7受體的表達以及其與雌激素對細胞增殖的影響
　　 目的：乳腺癌細胞MCF-7中P2X7受體的表達；雌激素和P2

11、X7受體對MCF-7細胞增殖的影響。
　　 方法：1.瓊脂糖凝膠電泳
　　 2. MTT法雌激素及拮抗劑ICI182780，雌激素選擇性拮抗劑[雌激素ERα拮抗劑(MPP，5×10-5mol/L)，雌激素ERβ拮抗劑(PHTPP，5×10-5mol/L)]，P2X7受體激動劑(BzATP)及拮抗劑(PPADS)，雌激素處理后P2X7受體拮抗劑對對MCF-7細胞增殖的影響。
　　 結論：雌激素通過雌激素受體ERα對

12、MCF-7細胞的生長有促增殖作用；P2X7受體對MCF-7細胞也有促增殖作用。
　　 第三部分雌激素對乳腺癌細胞MCF-7中P2X7受體mRNA和蛋白表達的影響
　　 目的：研究雌激素對P2X7受體mRNA和蛋白表達的調控作用
　　 方法：實時定量PCR和免疫印跡法檢測雌激素及拮抗劑ICI182780，雌激素選擇性拮抗劑[雌激素ERα拮抗劑(MPP)，雌激素ERβ拮抗劑(PHTPP)]處理后，P2X7受體mRNA